摘要：冻结工程中冻胀水对工程的施工安全产生重大影响,随着冻结工艺的不断发展与完善,从设计及冻结系统运行过程中采取一定措施,可以有效降低冻胀水对冻结工程的影响。

摘要：为了研究Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(FBA)是否为猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的毒力因子,并参与其致病作用,根据已发表的猪肺炎支原体醛缩酶全基因序列设计特异性的引物,以猪肺炎支原体168株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增醛缩酶基因。将FBA克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析,结果表明,FBA基因全长864 bp。将构建的重组表达质粒pET-28a(+)/FBA转化至大肠埃希菌BL21(DE3),通过筛选获得阳性克隆,重组工程菌在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白猪肺炎支原体Ⅱ类果糖二磷酸醛缩酶(Mhp FBA),大小约为35 ku。纯化蛋白并接种于猪气管上皮细胞至FBA终浓度分别为0、10、50、100、150、200μg/mL,孵育24 h后进行上清中丙酮酸浓度的检测和细胞凋亡检测。结果上清中丙酮酸浓度随着FBA浓度的上升,出现先极显著上升(P<0.01)、后急剧下降的现象;细胞平均凋亡率依次分别为3.54%、10.91%、13.99%、27.19%、32.84%和40.71%,并随着FBA浓度的升高而升高,且相比阴性对照组差异均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。成功构建了Mhp FBA重组菌,表达获得了Mhp重组蛋白FBA,该蛋白可能为猪肺炎支原体的毒力因子,参与猪肺炎支原体的致病作用,从而为进一步开展Mhp致病机理和药物研究奠定基础。

摘要：[目的]本试验旨在探索一种对猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)培养物中的支原体进行快速检测的竞争定量PCR方法。[方法]设计一对Mhp特异性引物,检测Mhp培养物;又根据支原体种属保守基因序列设计一对引物,通过酶切缺失法构建竞争模板,其携带与目的片段相同的引物结合区。[结果]以一系列稀释的竞争模板的对数值为横坐标(X轴),竞争模板和目标模板扩增产物的光密度比值的校正值的对数值为纵坐标(Y轴)绘制标准曲线,根据Y=0所对应的竞争模板的量推算求得支原体的拷贝数。以变色单位的对数值为X轴,支原体的拷贝数为Y轴,绘制出标准曲线,两者之间高度相关。[结论]成功建立了一种快速测定Mhp培养物中支原体量的竞争PCR方法。