摘要：目的优化沙门菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)分子分型方法,分析沙门菌标准菌株及流行分离株基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱。方法提取鼠伤寒沙门菌基因组DNA作为模板,根据ERIC核心片段设计引物,运用ERIC-PCR技术扩增沙门菌基因组中的靶序列,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像分析仪对图谱进行观察分析。反应体系中模板量、Mg2+浓度、引物浓度和退火温度的优化实验则采用对优化项目设置梯度、其它条件不变的方法进行。以优化好的ERIC-PCR方法对16株沙门菌及1株大肠杆菌进行分析。结果在总体积为25μl的反应体系中,选择DNA模板量为100ng/25μl,Mg2+浓度为2.0mmol/L,引物ERIC1R、ERIC2浓度分别为0.4μmol/L,退火温度为52℃时,扩增产物的电泳图谱条带最清晰完整。不同血清群、型和来源的沙门菌株间基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱带型差异较大,可在250～5000bp范围内出现3～13条条带,并在250bp处出现一条特征条带。结论优化了沙门菌ERIC-PCR的重要反应条件。ERIC-PCR法能区分不同来源的沙门菌,可用于沙门菌病的流行病学调查和同源性追踪,弥补传统分型方法的不足。

摘要：目的建立分子信标荧光定量PCR快速检测结核杆菌方法,为临床结核病的诊断提供特异性强、灵敏度高、可标准化、自动化的检测方法。方法根据GenBank数据库公布的结核分枝杆菌IS6110基因的保守序列,设计引物与分子信标探针,建立结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法;以10种细菌作对照分析该方法的特异性与灵敏度;应用已建立的方法检测结核分枝杆菌,评价其应用价值。结果所建立的分子信标荧光定量PCR检测10种细菌,只有结核分枝杆菌有荧光信号,与其他细菌无交叉反应,4拷贝/PCR反应体系的结核分枝杆菌都能有效检出。对100株结核分枝杆菌的检测结果为阳性,单一检测时间仅需2h。结论分子信标荧光定量PCR检测方法快速、灵敏度高、特异性强,可用于快速诊断结核病,为结核病的诊断与治疗提供新的检测手段。

摘要：目的建立5种生物恐怖细菌的快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法,即炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西斯菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的多重检测。方法针对炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西菌、类鼻疽伯克霍尔德菌的特异性基因序列设计6对引物和相应的特异性探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,标记的PCR产物与包被在不同编码微球上的相应探针杂交,用悬浮芯片扫描仪检测。结果多重PCR悬浮芯片检测体系能够正确的检测和鉴定5种生物恐怖细菌,特异性好,灵敏度高,可用于恐怖样本的高通量筛查。结论建立了多重PCR基因悬浮芯片快速检测几种生物恐怖细菌的方法。

摘要：目的优化金黄色葡萄球菌细菌基因组重复序列PCR（REP-PCR）指纹图谱分型方法,并在临床分离株分型研究中应用,为构建金黄色葡萄球菌同源性追踪体系提供依据。方法试剂盒法提取金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923基因组DNA作为模板,根据参考文献设计REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列。优化反应体系Mg2＋浓度、模板量、引物浓度和退火温度,以得到最佳指纹图谱。以优化好的REP-PCR方法对10株金黄色葡萄球菌临床分离株进行分型。结果PCR反应体系Mg2＋浓度2.5 mmol/L,DNA模板量125 ng/25μL,引物REP1R、REP2浓度各0.6μmol/L,退火温度40℃时,指纹图谱条带最清晰、明亮;10株临床分离株指纹图谱均在0.5～1.0 kb之间出现1条相同条带,其中1～3,4,5,8,9号菌株图谱相同;7和10号菌株除在0.5～1.0 kb出现1条条带外,还在1.0～1.5 kb出现1条条带,在1.5～2.0 kb出现1条条带;6号菌株共产生5条条带,分别出现在0.5～1.0 kb（2条）,1.0～1.5 kb（2条）和1.5～2.0 kb（1条）。结论成功建立优化的金黄色葡萄球菌REP-PCR指纹图谱分型方法；10株临床分离株用该法分为3型。

摘要：目的建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法，用于生物恐怖病原体的快速筛检。方法选择保守的细菌16S rDNA序列，并针对炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis，B．a）、鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis，Y.p）、布鲁菌属（Brucella spp.，Bru）、土拉弗朗西斯菌（Francisella tularensis，F.t）和类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei，B．P）等5种生物恐怖细菌设计种（属）特异性探针，经16S rDNA通用引物341A、519B扩增基因组DNA，用基因悬浮芯片方法进行检测，并对方法的灵敏度、特异度、重复性、检测能力进行验证。结果经16S rDNA通用引物扩增，特异性探针杂交检测，能将样本细菌鉴定到属水平，同属菌出现交叉反应；检出限分别为类鼻疽伯克霍尔德菌1．5pg／μl，布鲁菌属20pg／μl，炭疽芽孢杆菌7pg／μl，土拉弗朗西斯菌0．1pg／μl，鼠疫耶尔森菌1．1pg／μl；15次重复检测各探针变异系数（CV）为5．18％～17．88％，具有较好的重复性；方法可正确检出模拟白色粉末样本中炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森菌。结论建立了通用型基因悬浮芯片检测体系快速高通量筛查生物恐怖细菌的方法。

摘要：目的:建立SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法检测食品中转基因成分35S启动子和NOS终止子,并对样品进行检测。方法:以大豆Lectin基因为内源性基因,以转基因食品中常用的花椰菜花叶病毒启动子(Ca MV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)基因为目标基因,设计并合成3对特异性引物,优化反应条件,使用SYBR GreenⅠ染料实时荧光PCR检测35S启动子和NOS终止子,并做熔解曲线分析。同时利用该方法对胡萝卜、青豆、玉米、马铃薯等实际样品进行检测。结果:运用该方法检测8份样品,有4份检出35S基因和NOS基因成分。结论:SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法能有效检测出35S和NOS两种转基因成分,简便、快速。

摘要：目的建立TaqMan-MGB探针荧光定量PCR快速检测脑膜炎奈瑟菌(Nm)方法,为流脑的诊断提供更加灵敏、特异、可标准化、自动化的检测方法;评价TaqMan-MGB探针荧光定量PCR法在健康人群带菌调查中的应用价值。方法根据Nm ctrA基因的3端保守序列设计合成引物和TaqMan-MGB探针,建立快速检测脑膜炎奈瑟菌的荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化。结果TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测脑膜炎奈瑟菌的灵敏度为102cfu/ml,TaqMan-MGB探针法检测900份健康人群咽拭子标本,阳性34例,检出率3.8%,高于培养法(1.2%)。结论该方法特异性强、灵敏度高,能实现脑膜炎奈瑟菌的快速检测,适用于健康带菌检查并可作为临床常规诊断方法的补充,有利于流脑的早诊断、早治疗。

摘要：目的建立两种出血热生物恐怖病毒(马尔堡病毒、埃博拉病毒)的新型液相芯片检测方法。方法针对马尔堡病毒、扎伊尔埃博拉病毒的特异性基因序列设计2对引物和相应的TSPE引物。经多重PCR扩增之后、加入连有TAG的TSPE引物特异性识别靶目标,标记有生物素的dCTP加入到延伸序列中,TAG与微球上的anti-TAG互补,SAPE与生物素反应,SAPE发射荧光信号,信号由液相芯片仪器检测。结果液相芯片检测体系能够正确的鉴定和检测两种出血热病毒,特异性强、灵敏度高,可用于病毒的高通量筛查。结论建立了多重PCR基因液相芯片快速检测两种出血热病毒的新方法。

摘要：目的:建立脑膜炎奈瑟氏菌PCR检测的最佳反应体系,探讨影响检测的多个因素。方法:利用正交设计,对膜炎奈瑟氏菌PCR反应体系的4因素(Taq DNA聚合酶、引物、Mg2+、dNTP)在3个水平上进行优化实验,筛选出各反应因素的最佳水平。结果:正交实验结果表明,最佳反应体系为(50μl):TaqDNA聚合酶2.0U,引物0.3μmol/L,Mg2+3.0mmol/L,dNTP100μmol/L。结论:所得体系反应稳定,正交法实验设计高效、快捷,科学性强,值得推广。