摘要：利用shRNA(Small hairpin RNA)载体调控基因表达已经成为研究基因功能的有力工具。针对增强型绿色荧光蛋白标记基因(Enhanced green fluorescent protein,egfp),分别设计茎部长度为21bp、27bp、29bp的干扰片段,体外合成的单链shRNA片段退火后连入带有U6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中,酶切及测序结果证明设计的干扰片段已经成功克隆进入表达载体,为进一步在小鼠细胞以及个体水平上综合评价不同茎部长度shRNA的干扰效应奠定了基础。

摘要：本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。

摘要：聚3,4-乙撑二氧噻吩(PEDOT)具有能隙低、电化学掺杂电位低、响应时间短、颜色变化对比度高、稳定性好等优点,是目前国际上有机电致变色材料的研究热点。本文设计合成了3,4-乙撑二氧噻吩二聚体(Bis EDOT),并分别研究了Bis EDOT、3,4-乙撑二氧噻吩(EDOT)的电化学聚合性能,对二者性能进行了系统分析。实验结果表明所得聚合物PEDOT和Pbis EDOT均具有良好的电化学活性和稳定性。

摘要：根据GenBank中发表的猪胃蛋白酶原A(pepsinogen)基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了猪胃蛋白酶原A基因,该基因全长1 240 bp,将该基因克隆到表达载体pPIC3.5K的EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点构建重组表达质粒,通过电转化方法将重组质粒转化毕赤酵母GS115,检测结果表明猪胃蛋白酶原A基因在毕赤酵母中得到了表达.

摘要：根据GenBank中发表的新城疫病毒F48E9基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了该病毒HN基因中两个不交叉的基因片段,长度分别为790bp和579bp。将这两段基因分别克隆到pGEM-T vector中,经酶切鉴定和测序后克隆到原核表达载体pET-28a,PCR和酶切鉴定表明,克隆的两个新城疫病毒基因片段已经正确地插入到了原核表达载体pET-28a之中。

摘要：根据Genebank公布的J04601猪胃蛋白酶原A序列,进行了引物的设计和筛选,通过RT-PCR获得了湖北白猪的胃蛋白酶原A的cDNA序列全长,共1227bp(已提交Genebank,登录号EF108301),其具有一个长度为1158bp的读码框,编码385个氨基酸,其中包含15个氨基酸组成的信号肽,成熟的胃蛋白酶原A由370个氨基酸残基组成。与J04601比较,核苷酸和氨基酸相似性分别为99.3%和98.7%。经PredictProtein分析表明,核苷酸和氨基酸的改变没有造成蛋白质二级结构和功能的变化;并对胃蛋白酶原A基因密码子使用频率和mRNA的二级结构进行了分析,为其载体和宿主的选择以及基因的改造奠定了分子生物学基础。

摘要：本试验旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法检测猪生长抑素(SST)基因定点修饰靶点的活性。试验设计5个长20bp的单链导向RNA(sgRNA),即SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g2、SST-sgRNA-g3、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,将寡核苷酸序列连接到可同时表达Cas9和sgRNA的质粒中,挑选正确克隆的质粒作为模板进行体外转录形成SST-sgRNA。利用CRISPR/Cas9体外酶切含靶点的DNA片段,根据酶切条带的灰度换算成sgRNA活性。结果显示目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入到质粒中且序列正确,以质粒为模板体外转录SST-sgRNA成功。靶位点经Cas9蛋白酶切后与标准sgRNA1和sgRNA2酶切活性作比较,确定靶点SST-sgRNA-g1、SST-sgRNA-g4和SST-sgRNA-g5活性较高,可为在细胞水平、胚胎水平做基因定点修饰提供依据。

摘要：从转基因动物研究的目的出发,探讨转基因动物研究的不同思路,分析使用各种载体所考虑的基本出发点,说明受体动物遴选所需要考虑的因素,总结了转基因方法的技术特点,提出转基因动物检测手段的设计原则,论述了转基因动物繁殖的必要性,为从事转基因动物方面的研究提供技术思路。

摘要：根据乙脑病毒基因组3′末端保守区设计一对特异性引物,建立了乙脑病毒不同株的RT-PCR诊断技术。该技术可以从乙脑病毒WHe株、SA14-14-2株、P3株、SA14-14-2VS株接种的鼠脑组织中扩增出486bp的核酸片段,检出的灵敏度约为2pg。对20份临床样品的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但RT-PCR诊断技术可在3h内直接对组织进行诊断,具有敏感、快速、稳定的优点。

摘要：根据已经测定的乙脑病毒WHe株全基因组序列(GenBank EF107527),设计1对引物扩增基因组全长cDNA和2对特异性的鉴定引物。经RT-PCR技术扩增后,得到约9 kb的产物,经过反复实验,鉴定为外源性污染核酸扩增产物,并加以有效的排除,初步的研究表明该产物可能是由外源性污染核酸自身反向部分互补扩增所致。