摘要：目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(***)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至*** BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。

摘要：阐述课程思政和过程写作法的概念。以人教版(2019)高中《英语》必修三Unit 2 Reading for Writing板块的The Stone In The Road?为例,探究课程思政视域下过程写作法在高中英语写作教学中的应用。提出在写作前,以“素材和范文”为本,巧妙地融入思政元素;写作中,以“写作任务”为基,促进价值生成;写作后,以“写作成果”为载体,落实以评促改。强调让学生在写作过程中自然而然地接受思想教育,形成正确的价值观。

摘要：目的克隆、表达刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因,并分析其免疫原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgMDH的基因编码序列(GenBank登录号为AY650028)设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(***)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。重组质粒pET30a(+)-TgMDH转化至*** BL21,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。优化表达条件,获得大量可溶性蛋白。经镍亲和层析法纯化后滴鼻免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗重组rTgMDH蛋白血清。分别以小鼠抗rTgMDH血清和兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析rTgMDH蛋白的免疫原性。结果 TgMDH基因RT-PCR扩增产物约为951 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示重组质粒pET30a(+)-TgMDH构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(M_r)约36 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析结果显示,rTgMDH蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的TgMDH基因序列能在原核表达系统中高效表达,且具有免疫原性。

摘要：目的对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting分析其免疫原性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达。重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别。结论RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。

摘要：目的:克隆肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段(114～281氨基酸残基)并构建原核表达载体。方法:取健康人外周血提取总RNA,设计合成引物并引入EcoR I和Xho I酶切位点,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。结果:从外周血cDNA中扩增出501 bp的目的片段,测序结果证实成功构建重组质粒pGEX-6P-1/TRAIL。结论:成功构建TRAIL基因的原核表达载体pGEX-6P-1/TRAIL,为肿瘤细胞的凋亡研究提供理论依据。

摘要：专题式教学在医学教学工作中逐渐得到广泛应用,而新时代下如何利用网络的普及,扬长避短地应用到教学改革中,值得深入探讨。徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室提出基于问卷星平台的人体疾病学基础寄生虫内容专题式教学设计,在五个不同专题教学过程中,利用问卷星平台功能,及时快捷掌握教学效果,促进专题式教学更适应时代发展的改革,努力达到培养高素质医学院校非医学专业人才的目的。

摘要：目的建立敏感、特异的主要适用于蚊媒携带寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的核酸检测体系,构建新型质粒标准分子,并初步应用于广州地区白纹伊蚊野生种群ZIKV感染检测。方法从GenBank获取ZIKV全长序列,以MAGE6.0分析比对锚定保守区域作为靶标片段,结合Beacon Designer 7.5、Primer premier 6等设计引物及探针,采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增ZIKV RNA,获得检测靶标片段RZ-1,运用Overlapping PCR在RZ-1中间插入50bp内含子(mRZ-1),克隆获得ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1。构建并优化ZIKV巢式逆转录PCR(Nested RT-PCR)和荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测体系,用pBmRZ-1及不同来源的ZIKV标本对检测体系进行敏感性和特异性测试,并用于广州白纹伊蚊野生种群ZIKV检测。结果成功构建ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1及Nested RT-PCR和qRT-PCR检测体系。以pBmRZ-1测试最低检测极限(Limit of detection,LOD)Nested RT-PCR为5copies,qRT-PCR为1copy,qRT-PCR标准曲线拟合线性方程为Y=-3.387LOG(x)+41.43,相关系数R2=0.996,扩增效率为97.4%。该检测体系特异、敏感,能检出蚊虫和细胞感染的ZIKV,411份广州地区白纹伊蚊野生种群标本ZIKV检测阴性。结论成功构建了特异、敏感的ZIKV核酸检测体系,可用于蚊ZIKV检测,亦可用于细胞、血清标本的ZIKV检测。新型质粒标准分子pBmRZ-1能甄别标本中可能存在的来源于阳性参照的核酸污染。广州市白纹伊蚊野生种群未检出ZIKV。

摘要：目的重组、表达与纯化弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)具有生物活性的功能多肽,分析其抗原性。方法根据SAG1的基因序列设计引物,截除其前端的信号肽和后端的疏水区,只扩增650bp的功能区域;将该片段重组入带有His标签的pET-30a(+)质粒,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其在***中表达,调整诱导表达时间、IPTG浓度等条件,高效稳定地表达出目的蛋白;镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot检验纯化后蛋白的抗原性。结果成功构建pET-30a(+)/SAG1重组质粒,使其在***中高效稳定地可溶性表达,并确定出在0.5mmol/LIPTG浓度下诱导12h为最佳表达条件,Western-blot显示纯化后的蛋白具有良好的抗原性。结论获得了可溶性的弓形虫SAG1基因功能片段表达的产物,其具有良好的抗原性。

摘要：实验教学改革是高等医学教育改革的重要方面,如何在医学教育改革现阶段,配合整体改革趋势,逐步调整现有基础医学实验教学体系与模式,顺应理论教学改革步伐,是当前实验教学改革的课题之一。在病原生物学实验教学中,我们积极探索基于案例的临床思维及实验技术培养体系。依据临床典型案例为引导,引入实验课程基本内容;同时依据临床诊疗及相关科研进展,拓展课程学习要求。落实“早临床、多临床、反复临床”的医学教育构想,打造整合基础医学知识、融入思政内涵的医学实验课程“金课”,提高课程高阶性、创新性及挑战度,促进学生职业素质及创新能力的全面提升。

摘要：目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入*** BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在*** BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。