摘要：利用小鼠生物净化技术将实验小鼠的微生物级别由低级别提升至高级别已成为实验动物研究机构必不可少的一项业务,同时也是保障实验小鼠质量的重要技术手段。目前国际通用的小鼠生物净化方案以体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)技术为主。小鼠生物净化技术平台是一个综合性的实验室,涵盖了待净化小鼠饲养室、小鼠胚胎操作室、代孕小鼠饲养室、净化后小鼠饲养室等不同的功能区域。以浙江大学实验动物中心小鼠生物净化技术平台为例,分析小鼠生物净化技术平台的设计要点和运行模式,并从小鼠微生物质量控制、环境卫生控制和仪器设备维护方面讨论平台的维护,以期给同类型技术平台建设提供参考。

摘要：目的筛选豚鼠多态性微卫星标记,为鉴定豚鼠遗传结构及基因定位提供基础信息。方法从国外网站筛查得豚鼠基因组DNA资料,选择AC、GT为核心的微卫星序列,根据其旁侧序列用软件设计400对引物。经过二轮PCR及电泳等实验,以电泳条带作为遗传标记,通过豚鼠微卫星结构的评价筛选出多态性引物。结果第一步用5个品系豚鼠的10份DNA样本进行PCR,从400对引物中筛选出约110对具有多态性的豚鼠引物,其产物电泳条带数为1~3条。第二步用5个品系豚鼠的60份DNA样本进行PCR,从上述110对引物中筛选出51对电泳条带分辨率高的多态性引物,其中10余对引物在品系间呈标记一致或多数一致的差异。结论筛选出的51对引物在个体及品系间呈多态性,未见其他报道,可用于常规检测研究,部分可能用于豚鼠性状基因定位。

摘要：为获得小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)结构蛋白基因S1、S2、M及N,分别构建了4个重组质粒。依据GenBank公布的MHV A59毒株RNA全序列设计4对特异性引物,以A59 RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增出S1、S2、M及N这3个结构蛋白基因的4个片段,分别将其通过A-T连接入pMD-20 T载体后,双酶切鉴定正确后,送出测序确认。将测序结果与GenBank序列比对,确认扩增得到的S1、S2、M及N的核酸序列与其相似度分别为100%,99%,100%和99%。试验成功扩增出S1、S2、M及N的核酸序列,其构建的重组质粒可以作为检测MHV的阳性对照,为建立RT-PCR快速检测试验小鼠MHV的方法提供生物材料。

摘要：目的筛选豚鼠基因组的多态性微卫星标记,为豚鼠遗传质量控制及基因定位等工作奠定基础。方法采用磁珠富集法和豚鼠基因组数据库筛选法获取微卫星位点序列,通过分析和初步筛选,挑选部分候选位点,根据其序列设计引物,对5种不同来源的豚鼠基因组DNA标本进行PCR扩增,以期获得多态性分子标记。结果本实验采用磁珠富集法共获得微卫星序列304个,设计引物125对,最终获得多态性位点1个,暂未发现多态性的特异性位点17个;用数据库筛选法共获得微卫星序列292个,设计并合成相应引物178对,最终发现多态性位点25个,暂未发现多态性的特异性位点28个。结论本实验获得26个多态性微卫星标记,45个潜在的候选标记,为微卫星标记在豚鼠遗传质量监测及突变基因定位等工作的应用奠定了基础。

摘要：通过自行设计引物，建立了一种检测实验动物弓形虫的ＰＣＲ 方法，该方法具有高度特异性和敏感性。对几种实验动物的检测表明，购自农村的教学用兔体内可能有弓形虫，应予以重视。

摘要：目的利用成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9(Cas9)]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型,并对其表型进行初步分析。方法根据抑制素α亚基的第一外显子碱基序列,设计单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA)识别序列,构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后,将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射入C57BL/6J小鼠的受精卵,通过PCR和基因测序法检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变情况。选取F2代基因敲除纯合子的雄鼠和雌鼠,分别取雄鼠睾丸和雌鼠卵巢进行观察,并进行石蜡切片和HE染色分析。结果共获得了12只F0代抑制素基因敲除小鼠,选取8号雄鼠与C57BL/6J雌鼠回交,得到F1代小鼠,再相互交配得到F2代小鼠。F2代小鼠各基因型比例符合孟德尔定律,基因敲除小鼠不存在胚胎致死现象。F2代纯合子小鼠睾丸和卵巢发生癌变且无法生育。结论成功构建了抑制素基因敲除小鼠模型,F2代纯合子小鼠的癌变表型显示抑制素在小鼠生殖系统中发挥重要功能。