摘要：自行设计了抗肿瘤转移多肽-三聚β肽(β3),人工合成了β3的基因片段,构建了β3的表达质粒pET_His_β3,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。在用IPTG诱导1·5h后可见明显的His_β3融合蛋白的表达,表达产物约占细胞总蛋白的4%,占细胞总不溶性蛋白的10%。每升pET_His_β3/BL21(DE3)plysS细菌培养液用金属螯合琼脂糖凝胶6BFF分离后可回收纯度为92·2%的β3产物约20mg。所表达出的β3肽对人肝癌细胞株SMMC_7721细胞及人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞与纤连蛋白(fibronectin,FN)粘附具有特异的抑制作用,呈现剂量效应相关关系和时间效应相关关系,抑制作用强于β肽(β1)、3倍浓度的β1(3×β1)和GRGDS。研究结果表明:pET_His_β3/BL21(DE3)plysS是β3适合的表达系统;表达的β3肽具有特异的抗肿瘤细胞粘附作用。

摘要：目的　维甲类药物的分化诱导作用受特定组织表达受体的影响 ,了解肝癌组织表达维甲酸受体和维甲类X受体的表达 ,以便选择特异的维甲类药物治疗肝癌。方法　根据GeneBank的序列 ,设计对RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ基因的 6对引物 ,用RT PCR的方法检测 18例肝癌组织和相应癌周肝硬化组织这些基因的表达。结果　这些基因在肝癌组织表达率分别为 44 4% (8/18) ,16 7%(3/18) ,77 8% (14/18% ) ,88 9% (16 /18) ,77 8% (14/18) ,16 7% (3/18) ;癌周肝硬化组织分别为 2 7 8% (5 /18) ,0 % (0 /18) ,6 1 1% (11/18) ,77 8% (14/18) ,5 5 6 % (10 /18) ,0 % (0 /18)。这些受体亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织 ,但统计学无显著意义 (P >0 0 5 )。以 β actin为内标测定RARs和RXRs的相对表达量 ,RXRβ相对表达量高于癌周肝硬化组织 (配对秩和检验 ,P =0 0 2 0 8)。结论　由于肝癌组织表达有RARs和RXRs,提示除了应用全反式维甲酸治疗肝癌外 ,尚探讨RXRs选择性维甲类药物治疗价值。

摘要：目的 :探讨生长激素和谷氨酰胺促进小肠粘膜上皮细胞分裂增殖的作用途径及它们发挥协同作用的可能机制。方法 :选用 4 0只手术成功的SD短肠大鼠 ,按 2× 2析因实验设计随机分为四组 ,分别给予常规全肠外营养(STD组 ,n =1 0 )、附加谷氨酰胺 (Gln组 ,n =1 0 )、附加生长激素 (GH组 ,n =1 0 )及附加谷氨酰胺和生长激素全肠外营养 (GG组 ,n =1 0 ) ,持续 6天 ,取 8只正常大鼠模拟手术后第一天处死 ,作为基础对照组 (Gontrol组 ,n =8)。分别应用分光光度法和荧光分光光度法测定各组大鼠小肠粘膜上皮鸟氨酸脱羧酶和谷氨酰胺酶活性。结果 :谷氨酰胺能够显著增强小肠粘膜鸟氨酸脱羧酶和谷氨酰胺酶的活性 (P <0 .0 1 ) ,生长激素对这两种酶活性无明显影响 ,而联合应用谷氨酰胺和生长激素可明显增强此两种酶的活性 ,效果优于Gln的单独应用 (P <0 .0 1 )。结论 :研究表明联合应用生长激素和谷氨酰胺能显著增强短肠大鼠小肠粘膜上皮谷氨酰胺酶和鸟氨酸脱羧酶活性 ,促进小肠粘膜细胞对谷氨酰胺的代谢和多胺的生成 ,从而发挥其促进小肠粘膜细胞分裂增殖 ,防止小肠粘膜萎缩的发生的作用。

摘要：目的　本实验为检测肝癌组织中是否有端粒酶活性，端粒酶活性与肝癌临床检测指标ＡＦＰ及高低转移潜能是否相关而设计。　方法　本实验用ＴＲＡＰ法从组织中抽提端粒酶，经反转录并ＰＣＲ 扩增后用地高辛标记的探针作斑点印迹杂交（ 肝癌标本部分） 和ＰＡＧ电泳加银染法显色（ 人肝癌高低转移裸鼠模型） 。　结果　本实验检测了１１ 例肝癌患者有肝癌组织和癌周组织的端粒酶活性，结果肝癌组织中端粒酶活性为９３－８８（单位：ＩＯＤ值） ，癌周组织端粒酶活性为２４－０９，两者的差别有统计学意义（Ｐ＜ ０－００１） 。正常组织（ｎ ＝ ５） 中未检测到端粒酶活性。端粒酶活性与ＡＦＰ浓度的相关系数ｒ＝０ ．７２，与肿瘤大小的相关系数ｒ＝ －０－２９８。人肝癌高转移模型裸鼠ＬＣＩＤ２０ 的端粒酶活性为（７７－６７±６－９３），低转移模型裸鼠ＬＣＩＤ３５ 的为８２－１６ ±１５－９３），两者之间并无显著性差异（ Ｐ＞ ０－０５） 。　结论　肝癌组织的端粒酶活性明显地高于癌周组织，正常组织中未检测到端粒酶活性。端粒酶活性与ＡＦＰ及肿瘤大小无关。

摘要：肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是常见的恶性肿瘤之一,全球每年超过50万人确诊为HCC.我国HCC病死率占全球HCC病死率的50％,转移和复发是导致其高病死率的主要原因[2].HCC的诱发涉及多种因素,主要有肝炎病毒的感染、黄曲霉毒素的摄入、饮水中蓝藻毒素污染以及吸烟、酗酒等.随着研究的不断深入,人们发现,HCC的发生、转移等过程常伴随有HCC细胞表面糖蛋白的异常糖基化.异常糖基化是由一种或多种糖基转移酶（glycosyltransferase,GT）表达水平或活性改变引起的.对GT的研究可以为HCC的临床诊断以及抗HCC药物作用靶点的设计提供理论依据.

摘要：简述近年复旦大学肝癌研究所获“九五”国家科技攻关等基金的资助对防治原发性肝癌复发转移的临床与基础研究课题的一些进展。在临床研究方面 ,亚临床复发作再切除手术是进一步提高疗效的主要途径 ,但预防复发则甚为困难。术后栓塞化疗(TACE)、生物治疗、术中肝动脉插管、冷冻肝切除等 ,可能有助于降低术后复发率。在实验研究方面 ,建立了人肝癌转移动物模型和细胞株。在分子水平对肝癌侵袭性作了研究 ,初步发现C erbB2、p16、p21、p53、mdm 2、VEGF、TGFα、EGF受体、MMP 2、μPA、μPA R、ICAM 1与肝癌侵袭性呈正相关 ;nm23 H1、TIMP 2、Integrinα5、E cadherin、Kai 1则呈负相关。在实验性干预治疗方面 ,反义H ras、Suramin、Heparin、抗肿瘤血管生成TNP 470、抗CD3/抗HBx的双特异抗体合并LAK治疗、基质金属蛋白酶抑制剂BB 94及我所自行设计的β 肽等对肝癌转移模型均有抑制转移的作用。预期生物治疗、转移复发的预测指标、多模式的干预治疗对防治肝癌转移甚为重要 。

摘要：目的观察趋化因子受体CCR1在高转移潜能人肝癌细胞HCCLM3侵袭中的作用。方法设计并合成3对靶向CCR1 mRNA的寡核苷酸片段,将其连接pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体构建表达microRNA(miRNA)真核载体S1、S2、S3,脂质体转染法将重组质粒转入HCCLM3细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析CCR1 mRNA抑制效率;Western印迹测定CCR1蛋白的表达量改变;MTT法检测HCCLM3增殖的影响;Matrigel侵袭实验检测HCCLM3细胞侵袭力的改变。结果转染48 h后,S3组CCR1 mRNA较空转染组(Mock)和非特异序列组(Neg)减少80%以上,且明显少于其他组(P<0.01);72 h后S3组CCR1蛋白表达明显少于其他组;转染后,HCCLM3细胞的增殖改变差异无统计学意义。Matrigel侵袭实验结果示转染S3后HCCLM3细胞穿过人工基底膜的数量减少80%,显著低于其他组(P<0.01)。结论人肝癌细胞HCCLM3的CCR1表达可被质粒导入的外源性miRNA有效抑制,进而降低HCCLM3细胞侵袭性,但对细胞增殖无明显影响。

摘要：本文简述近年我所获“九五”国家科技攻关等基金资助的此课题研究的一些进展。在临床研究方面,亚临床复发作再切除手术是进一步提高疗效的主要途径,但预防复发则甚为困难。术后检塞化疗(TACE)、生物治疗、术中肝动脉插管、冷冻肝切除等,可能有助于降低术后复发率。在实验研究方面,我所建立了人肝癌转移动物模型和细胞株。在分子水平对肝癌侵袭性作了研究,初步发现C-erbB2、p16、 p21、p53、mdm-2、VEGF、TGFα、EGF受体、MMP-2、μPA、μPA-R、ICAM-1与肝癌侵袭性呈正相关;nm23-H1、TIMP-2、Integrin α5、E-cadherin、Kai-1则呈负相关。在实验性干预治疗方面,反义H-ras、Suramin、Heparin、抗肿瘤血管生成TNP-470、抗CD3/抗HBx的双特异抗体合并LAK治疗、基质金属蛋白酶抑制剂BB-94、我所自行设计的β肽等对肝癌转移模型均有抑制转移的作用。预期生物治疗、转移复发的预测指标、多模式的干预治疗对防治肝癌转移甚为重要,其中抗肿瘤血管途径尤为突出。

摘要：目的 探讨醛酮还原酶1B10（AKR1B10）基因在肝癌发生和发展过程中的作用及其机制.方法 化学合成AKR1B10序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectaminrTM2000介导转染人肝癌细胞系MHCC97H,设实验组转染AKR1B10-小干扰RNA,设阴性对照组转染非编码序列双链小RNA,设空白对照组不作转染.用实时定量PCR、Western blot和酶活性检测法检测AKR1B10 mRNA和蛋白的表达情况,用细胞计数试剂盒CCK-8检测转染细胞的生长增殖变化,用流式细胞仪检测膜联蛋白V/碘化丙啶双标记的凋亡细胞变化,并用实时定量PCR检测c myc、c-fos、N-ras、ki-67、caspas 3、bax肿瘤相关基因的表达变化.用析因设计的方差分析和完全随机方差分析进行组间比较,LSD法进行多重比较.结果 转染24、48 h和72 h后,AKR1B10 mRNA的相对表达量在实验组分别为0.382±0.048、0.098±0.008和0.257±0.032;阴性对照组分别为0.797±0.092、0.742±0.086和0.794＋0.105;空白对照组分别为0.808±0.118、0.716±0.083和0.706±0.067.不同转染时间和不同实验组中AKR1B10 mRNA的表达比较,F值分别为11.650和566.971,P值均＜0.01,差异均有统计学意义.转染24、48 h和72 h后,实验组的AKR1B10mRNA表达较空白对照组被明显抑制,抑制率分别为52.7%±5.6%、86.3%±4.4%和63.7%±6.1%,以转染48 h的抑制率最高（t=80.68,P＜0.01）;阴性对照组的表达水平接近空白对照组（P＞0.05）.Western blot结果显示,转染24、48 h和72 h后,实验组的AKR1B10蛋白表达水平均有下降,其中以转染72 h的降低幅度最大;阴性对照组的表达水平接近空白对照组.转染24、48、72h和96h后,实验组450nm处吸光度值分别为1.465±0.040、1.724±0.106、1.934±0.069和2.377±0.163;阴性对照组分别为1.528±0.044、2.019±0.091、2.711±0.204、3.151±0.159;空白对照组分别为1.567＋0.057、2.102±0.099、2.642±0.198、3.069±0.180;不同转染时间和不同实验组间比较,F值分别为128.092、36.535,P值均＜0.01,差异均有统计学意义.转染了AKR1B10-siRNA的MHCC97H细胞生长受到抑制.与空白对照组相比,实验组的细胞生长抑制率在转染48、72 h和96 h分别为18.0%±1.6%、26.1%±3.2%和22.5%±1.1%,t值分别为19.197、13.093和23.553,P值均＜0.01,差异均有统计学意义;阴性对照组的细胞生长未受到明显抑制（P＞0.05）.实验组、阴性对照组和空白对照组各基因mRNA的相对表达量：c-myc基因分别为1.047±0.156、1.737±0.193和1.631±0.128;c-fos基因分别为0.041＋0.003、0.082±0.006和0.081±0.004; N-ras基因分别为0.082±0.009、0.156±0.013和0.133±0.015;ki-67基因分别为0.032±0.002、0.070±0.008和0.069±0.005; caspasc-3基因分别为0.148±0.018、0.110±0.009和0.108＋0.012;bax基因分别为0.780±0.092、0.629±0.058和0.617±0.073,各基因的mRNA在不同组别表达差异均有统计学意义（F值分别为104.384、400.915、211.903、427.041、67.750和37.272,P值均＜0.01）.结论 AKR1B10可能通过调节肿瘤相关基因的表达水平来促进细胞增殖、抑制细胞凋亡.

摘要：选用 4 0只手术成功的SD短肠大鼠 ,按 2× 2析因实验设计随机分为 4组 ,分别给予常规全肠外营养 (TPN组 ,n =10 )、附加谷氨酰胺 (TPN +Gln组 ,n =10 )、附加生长激素 (TPN +GH组 ,n =10 )及附加谷氨酰胺和生长激素全肠外营养 (TPN +Gln +GH组 ,n =10 ) ,持续 6天 ,取 8只正常大鼠模拟手术后第 1天处死 ,作为基础对照组 (n =8)。应用放免分析法检测血生长激素和血IGF 1的水平 ,Northernblot方法检测残留小肠粘膜IGF 1mRNA表达。探讨了联合应用生长激素和谷氨酰胺防止小肠粘膜萎缩的可能分子机制。结果表明 ,GH组和GG组血浆GH和IGF 1水平较TPN和TPN +Gln组明显增高 (P <0 .0 1) ;TPN组小肠粘膜组织IGF 1mRNA表达明显低于对照组 (P <0 .0 1) ,TPN+Gln组和TPN +GH组小肠粘膜IGF 1mRNA的表达较TPN组明显增高 ;TPN +Gln +GH组小肠粘膜组织IGF 1mR NA的表达水平提高显著 ,高于TPN +GH组和TPN +Gln组 (P <0 .0 1)。这说明 ,生长激素和谷氨酰胺的联合应用可能通过上调小肠粘膜细胞IGF 1mRNA的表达 ,增加IGF 1的自分泌和旁分泌 ,发挥其促进细胞分裂增殖和抑制细胞凋亡作用 ,从而防止小肠粘膜萎缩的发生。