摘要：目的以骨桥蛋白(OPN)为分子靶点,观察经动脉外膜转染siRNA-OPN对球囊损伤后大鼠颈动脉内膜损伤后局部内膜增生的影响。方法设计并合成了3对大鼠siRNA-OPN,应用实时PCR的方法,分别检测其对原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞OPN-mRNA表达的影响,筛选出其中最敏感的siRNA-OPN-002序列作为转染基因。利用球囊损伤的方法制备大鼠颈动脉内膜损伤模型后,应用30%pluronic gel溶液经血管外膜局部转染OPN-siRNA,应用免疫组化、实时PCR、Western印迹等检测转染OPN-siRNA-002后,OPN的表达变化,以及抑制血管内膜增生的作用。结果经动脉外膜转染Cy3标记的siRNA后,可见Cy3-siRNA分布于血管壁内,转染siRNA-OPN-002后,其OPN的mRNA和蛋白的表达水平与转染SCR-siRNA和对照组比较,在各个时间点上均显著降低(P<0.001),并且这种下降趋势一直持续到实验结束的14d,其内膜的增生也受到了明显的抑制(P<0.001)。结论经动脉外膜转染OPN-siRNA-002可持续明显地抑制大鼠动脉内膜损伤后局部细胞的OPN mRNA和蛋白表达,具有抑制内膜增生作用,OPN可望成为防治血管再狭窄的重要的靶分子。

摘要：背景:血管平滑肌细胞由收缩型向合成型的转变过程中线粒体可能参与了这个复杂的过程。目的:拟观察线粒体功能相关的PGC-1/NRF-1/mtTFA通路在人血管平滑肌细胞增殖中的作用。设计、时间及地点:分组设计,对比观察,于2007-01在中国医科大学附属一院中心实验室完成。材料:氧化型低密度脂蛋白由中科院协和研究所提供;叠氮钠由国药集团化学试剂有限公司沈阳分公司提供;人脐动脉平滑肌细胞由中美科技有限公司提供。方法:实验分为4组,对照组予以正常培养基;氧化型低密度脂蛋白组常规培养基中加入氧化型低密度脂蛋白使其终浓度达到10mg/L作用24h;PGC-1反义组在氧化型低密度脂蛋白组干预措施的基础上,将细胞以1×108L-1的密度接种于6孔板上,并将配置好的反义PGC-1寡核苷酸脂质体复合物70μL加入各孔,6h后补充小牛血清和培养基;叠氮钠组在氧化型低密度脂蛋白组干预措施的基础上,培养基中加入叠氮钠使其终浓度达到32mmol/L作用24h。主要观察指标:蛋白免疫印迹检测各组干预后培养细胞中PGC-1、NRF-1和mtTFA蛋白表达。观察各组干预完成后线粒体功能改变。四甲基偶氮唑盐比色法检测各组细胞活性。结果:与对照组相比,氧化型低密度脂蛋白组PGC-1、NRF、mtTFA蛋白表达、线粒体细胞色素C氧化酶酶活性及细胞增殖活性均增加(P<0.05)。与氧化型低密度脂蛋白组相比,PGC-1反义组PGC-1、NRF-1和mtTFA的蛋白表达减少、线粒体细胞色素C氧化酶酶活性及细胞增殖活性均下降(P<0.05);叠氮钠组PGC-1、NRF、mtTFA蛋白表达及细胞色素C氧化酶酶活性降低(P<0.05);细胞增殖受到抑制(P<0.05)。结论:PGC-1/NRF/mtTFA信号传导途径在人血管平滑肌细胞增生过程中通过改变线粒体功能影响细胞的生长状态。