摘要：目的探讨重组人血小板源性生长因子-BB（rhPDGF-BB）对人视网膜血管内皮细胞（hRVECs）增生和迁移的影响及其作用机制。方法采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液培养hRVECs，分别将10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB加入对数生长期hRVECs的培养液，未添加rhPDGF-BB者作为正常对照组。采用细胞计数试剂盒-8（CCK8）法检测各组细胞的增生情况；采用细胞划痕法检测细胞相对迁移面积（迁移后无细胞区面积/划痕初期无细胞区面积）；采用逆转录PCR法检测hRVECs中rhPDGF-BB受体（rhPDGF-BBR）mRNA的相对表达量；采用实时荧光定量PCR法检测hRVECs中VEGF mRNA和整合素mRNA相对表达量。结果培养的hRVECs生长良好，用rhPDGF-BBR引物能扩增出与引物设计长度相符的表达条带。正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组培养细胞后24 h细胞增生值（A）分别为1.01±0.05、1.09±0.04、1.10±0.02和1.13±0.05，10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组A值明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（t＝2.504、3.430、3.483，均P〈0.05）；细胞划痕试验后24 h，正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞相对迁移面积分别为0.42±0.10、0.38±0.09、0.55±0.06和0.61±0.05，划痕试验后48 h细胞相对迁移面积分别为0.75±0.06、0.81±0.02、0.87±0.02和0.98±0.02，总体比较差异均有统计学意义（F分组＝16.283，P＝0.000；F时间＝209.129，P＝0.000），随着rhPDGF-BB剂量增加和作用时间延长，细胞相对迁移面积均明显增加；实时荧光定量PCR法检测显示正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组hRVECs中整合素mRNA相对表达量分别为1.06±0.02、1.30±0.10、1.20±0.16和1.27±0.08，VEGF mRNA相对表达量分别为0.97±0.05、1.06±0.16、1.58±0.18和1.66±0.21，其中50 ng/ml和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞中整合素mRNA及VEGF mRNA相对表达量均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（整合素mRNA：t＝3.900、4.014，均P〈0.05；VEGF mRNA：t＝6.940、7.210，均P〈0.05）。结论rhPDGF-BBR促进hRVECs的增生和迁移，其作用呈剂量和时间依赖性，其可能与上调VEGF和整合素在细胞中的表达有关。

摘要：目的探讨外源性肿瘤坏死因子α（TNF—α）局部干预对碱烧伤诱导角膜新生血管（CNV）形成的影响及内在机制。方法BALB／c小鼠45只，利用碱烧伤法制作左眼CNV模型。根据实验设计．分3组实验进行研究。①CNV模型小鼠15只，随机分为3组，每组5只。自伤后分别给予100、500μg／ml TNF—α（实验组）或0-2％透明质酸钠（HA，对照组）点眼1周。于碱烧伤后第14天处死小鼠取眼球，免疫组织化学法检测各组角膜组织中CD31的表达，计数微血管密度（MVD），分析TNF-α对碱烧伤CNV形成的作用。②CNV模型小鼠20只．随机分为2组，每组10只。实验组给予100μg／mlTNF一仅点眼，对照组给予0．2％HA点眼。分别于伤后第2天和第4天随机取5只小鼠处死取角膜．RT—PCR法检测角膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达情况，分析TNF—α对碱烧伤角膜中VEGF表达的影响。③利用二氯亚甲二磷酸脂质体（Cl2MDP—lip）射制作小鼠巨噬细胞特异剔除模型，10只BALB／c小鼠随机分为Cl2MDP—lip实验组及PBS—lip对照组，每组5只。所有小鼠自碱烧伤后均给予100μg／mlTNF-α滴眼1周于.伤后第14天拍照记录CNV形成情况，图像分析软件测算CNV长度及面积，分析巨噬细胞在TNF—α调控碱烧伤后CNV形成中的作用。结果①碱烧伤后第14天，100μg／mlTNF-α组CNV形成较对照组明显增多．而500μg／ml TNF-α组CNV形成与对照组差异不明显。整张切片和热点区域MVD值，100μg／ml TNF-α组为63．25±9．75和114．94±12．93，500μg／ml TNF-α组为39．53±10．41和108．04±23．55．0．2％HA对照组为30．99±7．08和73．81±13．80和100μg／mlTNF—α组与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），而500μg／mlTNF-α组与对照组相比差异无统计学意义（19〉0．05）。②碱烧伤后第2天和第4天VEGFmRNA与β—actin的比值，100μg／mlTNF-α组为0．40±0．12和1，51±0．21，0．2％HA对照组为0，31±0．10和0．58±0．30。两组差异均有统计学意义（P〈0．05）。⑧碱烧伤后第14天，Cl2MDP—lip组CNV形成较对照组明显减少，Cl2MDP—lip组的CNV长度和面积分别为（0．84±0．10）mm和（6．64±1．19）mm^2,PBS—lip对照组为f1．37±0．24）mm和（12．25±1．33）mm^2，两组差异有统计学意义（P〈0．01）.结论外源性TNF-α可通过上调碱烧伤角膜组织中VEGF表达来促进CNV的形成，其促进碱烧伤CNV形成机制主要是通过巨噬细胞起作用．