摘要：目的研制一种能够用于快速鉴定单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)的质粒DNA标准物质。方法设计一种质粒DNA包含目前常用于单增李斯特菌检测的hlyA、plcB、inlA基因,并对其稳定性、均匀性和量值可追溯性进行评价。评估其在实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测中的适用性。结果质粒DNA参考物质的最终定值结果为29.85μg/mL。该质粒DNA参考物质量值可靠,均匀性和稳定性良好,可以在-20℃下保存1年以上。质粒DNA参考品在实时荧光PCR检测中的适用性证明,可以保证实时定量PCR检测结果与单增李斯特菌基因组DNA参考品具有可比性。结论研制的质粒DNA标准物质可以替代单增李斯特菌基因组DNA对单增李斯特菌进行质量监控,满足单增李斯特菌检测在实验室质量的有效控制和试验方法验证的需要。

摘要：目的制备包含伤寒沙门氏菌的三种检测靶标序列se、st、aceA的质粒DNA参考品。方法设计一种质粒DNA包含目前用于沙门氏菌检测和分型常用的se、st、aceA的质粒(pDNA Salmonella),对其序列的稳定性,均一性和量值可追溯性进行评价,并验证其与沙门氏菌基因组DNA参考品在实时定量PCR应用中的可比性。结果经多个实验室定值后,pDNA Salmonella最终定值结果为30.08μg/mL pDNA。Salmonella均一性,稳定性良好,可在-20℃长期保存,并且在实时定量PCR应用中与基因组参考品具有可比性。结论 pDNA Salmonella具有良好的序列准确性和可追溯性,这项研究重点是证明了快速合成的质粒作为鉴定伤寒沙门氏菌qPCR参考品的可行性。