摘要：目的合成和筛选nog066-siRNA干扰片段，克隆神经生长因子-β（NGF-β），构建含nog066-siRNA和NGF-β双基因的重组腺相关病毒穿梭质粒。方法设计针对nog066的siRNA，插入载体pGenesil-1．1，转染大鼠胶质瘤C6细胞，通过RT-PCR和Western-blot检测筛选有效的干扰质粒；培养人MIApaca-2细胞，提取总RNA，进行RT-PCR得到人NGF-β基因，插入T-easy载体；将pGenesil-1．1与pAAV-MCS进行重组，得到含u6和CMV双启动子的重组腺相关病毒穿梭质粒pAAV—U6／CMV—EGFP；将nog066一siRNA和NGF-β分别插入pAAV-U6／CMV-EGFP中，构建含nog066-siRNA和NGF-β双基因的重组腺相关病毒穿梭质粒。结果干扰质粒pGenesil-nogo66-siRNA测序显示十扰序列正确；RT-PCR结果显示转染后各条带相对亮度有差异，转染pGenesil-nog066-siRNA-1和pGenesil-nog066-siRNA-2使nogo基因表达降低；Western-blot结果显示转染pGenesil-nogo66-siRNA、1使NOGO蛋白表达下降73％，转染pGenesil-nog066-siRNA-2使NOGO蛋白表达下降78％，与未转染组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；质粒T-easy-NGF-β酶切可见3000bp、736bp条带，测序显示基因序列正确；酶切pAAV-U6／CMV-EGFP、pAAV-U6-nog066-siRNA／CMV-EGFP町见4300bp、800bp条带．转染细胞后均可见绿色荧光蛋白表达；酶切pAAV-U6／CMV-NGF-β、pAAV-U6-nog066-siRNA／CMV-NGF-β可见4300bp、736bp条带；质粒pAAV-U6-nog066-siRNA／CMV-NGF-β测序显示载体中的基因序列正确。结论成功构建了含有nog066-siRNA与NGF-β双基因的重组腺相关病毒穿格质粒，为深入研究脊髓损伤的修复提供了实验基础。