摘要：为解决现有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因全序列获得方法存在的成功率低、操作繁琐的问题,针对NCBI中已知PEDV S基因上下游序列,筛选保守区域用于RT-PCR扩增引物的设计,并从特异性、灵敏性以及临床应用效果等方面对该方法进行了验证。结果显示,成功建立了一种可通过1对引物实现PEDV S基因全序列及其上下游部分片段体外扩增的RT-PCR方法,最适退火温度为52℃。该方法具有高度的特异性,仅可与PEDV的cDNA发生反应,不与猪其他常见病原的cDNA或DNA发生交叉反应;具有良好的灵敏性,检测限为4.44×10^(4)copies/μL;具有良好的普适性,10份PEDV临床阳性样品均可扩增出预期大小的目的片段,并成功实现了S全基因测序和遗传进化分析。该方法的建立简化了S基因全序列体外扩增的方法,提高了体外扩增的成功率。