摘要：根据猪札幌病毒(Porcine Sapovirus,SaV)的VP1保守基因序列设计引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,并与常规RT-PCR检测方法进行了比较。结果表明,荧光定量RT-PCR方法的检测灵敏度可达16.1拷贝.μL-1,而常规RT-PCR方法的灵敏度为1.61×103拷贝.μL-1。对216份粪样的检测结果进一步表明该法(检出4份)比常规RT-PCR方法(检出3份)的灵敏度高。系统进化分析表明,该4株病毒均为GⅢ型,与SaV上海分离株(FJ387164)同源性为100%。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于猪SaV感染的流行病学调查和临床诊断。

摘要：根据GenBank提供的*** Mb1761c基因序列设计引物。以牛分枝杆菌DNA为模板,通过PCR方法扩增出牛分枝杆菌MB1761c基因片段,以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切PCR产物和pET28a(+)后将纯化的Mb1761c基因克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达质粒,再转化到*** BL21(DE3)表达菌株中,IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE,分析可见约29ku特异性蛋白条带,Western blot分析发现,该融合蛋白具有较强的免疫原性,从而为进一步研究其亚单位疫苗及DNA疫苗奠定了基础。

摘要：目的构建牛分枝杆菌Mb2277基因的原核表达载体,获得高纯度的融合表达蛋白,并对其表达产物的免疫原性进行初步研究。方法根据GenBank提供的***2277基因序列设计引物。以牛分枝杆菌(93006)DNA为模板,通过PCR方法扩增出Mb2277基因片段,以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切PCR产物和pET28a(+),后将纯化的Mb2277基因克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达质粒,再转化到***21(DE3)表达菌株中,IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE,进一步利用Western Blot对表达产物的反应原性进行研究。结果获得了牛结核分枝杆菌Mb2277原核表达质粒,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约25ku蛋白表达条带,Western Blot结果显示,表达产物与兔抗分枝杆菌抗体具有反应性。结论该蛋白具有较强的反应原性。

摘要：根据NCBI上输血传播性病毒(Torque-Teno virus,TTV)犬基因组序列(Cf-TTV10,GenBank登录号:AB076002)设计嵌套引物,从犬血清与粪便中鉴定出TTV。199份犬血清样品中检出阳性率为14.6%(29/199),158份犬粪便样品的检出率为12.7%(20/158),通过基因分析与鉴定确定为同一型,验证了从粪便样品和血液样品的提取检测的犬TTV阳性率基本保持一致(P>0.05),为下一步进行TTV的传染特性和分子流行病学的研究提供了基础。

摘要：本文根据兽医硕士专业特点,借助上海交通大学地处大都市、理工科综合性强的优势,从课程体系、教材体系、论文研究方向及内容界定和管理等方面,高起点地探索适合综合性大学兽医硕士专业学位论文(设计)模式。通过几年的应用,取得了很好的成绩,说明我们初步建立的综合性大学兽医专业硕士学位论文(设计)模式是成功的。

摘要：本研究根据GenBank上猪嵴病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,建立猪嵴病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好。应用该PCR方法对2010年在上海周边地区采集的116份猪粪样品进行检测,结果45份为猪嵴病毒阳性,表明上海地区猪群中猪嵴病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以用于猪嵴病毒的流行病学监测。

摘要：根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用RT-PCR技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出了240bp的片断,而Pa/Pb与牛睾丸原代细胞、PK-15细胞、BVDVOregonC24V株均无反应,Pa/Pc也不与所试验的5株猪瘟毒株反应。采用多重PCR可以从同时含有HCV和BVDV核酸的样品中扩增出各自的特异性条带。针对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的特异性插入序列,设计了引物Pr、Pra、Prb,可以从HCLV细胞毒或用HCLV人工感染的兔脾组织毒中扩增出预期200bp的片断,而Pr、Pra、Prb与猪瘟Thiveral株和3株猪瘟野毒株均不反应。通过含毒量梯度试验,得出了RT-PCR可检测猪瘟病毒量的下限为200RID或200TCID50。

摘要：目的建立快速检测空肠弯曲菌的PCR方法。方法从鸡猪样品中分离培养获得空肠弯曲菌,以该菌特异的VS1基因保守序列为模板自行设计引物,扩增产物为516bp片段,同时进行特异性、灵敏度试验。结果显示该方法只对空肠弯曲菌有扩增产物出现,而其它细菌如大肠杆菌、沙门氏菌、无乳链球菌、粪链球菌、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌ATCC、腐生葡萄球菌等均不能扩增出特异性片段,检测灵敏度达6 CFU/ml。结论该方法具有灵敏、高效、特异、稳定的特点。

摘要：用PK-15细胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法扩增核衣壳蛋白(Cap蛋白)全基因,克隆到pET-32a载体中,构建了表达载体pETORF2,转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,结果显示表达的蛋白大小与设计不符。同样的方法,又构建了表达载体pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符。对Cap蛋白编码基因进行改造,在不改变原氨基酸序列的基础上,把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子,根据此序列,设计了4条长引物,参照SOE的原理,用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段,并克隆到pET-32a载体中,成功构建了重组表达载体pETP1P4。SDS-PAGE电泳结果表明,表达的蛋白分子量与设计相符。

摘要：根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列，设计一　对引物，应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体，筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２，并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析，结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％，与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切，回收ＯＲＦ２基因，转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间，构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。