摘要：根据GenBank中发表的猪胃蛋白酶原A(pepsinogen)基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了猪胃蛋白酶原A基因,该基因全长1 240 bp,将该基因克隆到表达载体pPIC3.5K的EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点构建重组表达质粒,通过电转化方法将重组质粒转化毕赤酵母GS115,检测结果表明猪胃蛋白酶原A基因在毕赤酵母中得到了表达.

摘要：将本实验室分离保存、已经过PCR扩增、核酸测序鉴定的三种不同亚型禽流感病毒(AIVH5N1、H6N2、H9N2)分别接种鸡胚,收集尿囊液,分离提取AIV总RNA。参考H1￣H15亚型禽流感病毒的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计四对引物:NP1,NP2;H5P1,H5P2;H6P1,H6P2;H9P1,H9P2,混合为PCR扩增多重引物MP1,下游引物NP2、H5P2、H6P2,、H9P2混合为逆转录反应多重引物MP2。AIV总RNA在相同反应条件下经MP2逆转录,用MP1进行PCR扩增,AIVH5亚型材料得到205bp,563bp两条扩增带,AIVH6亚型材料得到205bp,233bp两条扩增带,AIVH9亚型材料得到205bp,690bp两条扩增带,都与实验设计相符合,阴性材料没有扩增带。该方法成功实现四对引物进行RT-PCR反应同时检测出AIV,准确诊断H5、H6、H9三种禽流感亚型,检测时间短,特异性强,能及时检测出AIV亚型。

摘要：参考H1-H15亚型禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因,共设计4对引物,建立了2对引物扩增AIV的NP、HA基因的多重RT-PCR方法。应用此法分别对H5、H6、H9亚型AIV尿囊液RT-PCR,电泳,回收预期片段进行测序,并同Genebank的注册序列进行同源性分析。也对NDVI、BVI、BDV尿囊液以及3种亚型AIV尿囊液的2倍系列稀释样品进行检测。结果表明,3种亚型AIV尿囊液均出现2条特异性条带,经测序确证为目的扩增片段,BLAST的同源性初步判断3种AIV的亚型为H5N1、H6N2、H9N20对NDVI、BVI、BDV的RNA扩增未见2条目的条带,判断为阴性,说明该法特异性强;能对3种亚型AIV尿囊液64～128倍稀释的样品检测出AIV,表明其灵敏度高。该检测法检测的整个过程仅需4h,实现了AIV的快速检测。

摘要：参考人、鸡、鼠的ＥＳＲ 基因序列， 设计一对引物， 采用ＰＣＲ 技术扩增出猪的ＥＳＲ 基因一段ＤＮＡ 片段。将该片段克隆到ｐＧＥＭＴＥａｓｙ 质粒载体中， 重组质粒经ＰＣＲ 鉴定和酶切分析确定克隆成功。经测序结果分析确定该片段为猪ＥＳＲ 基因与其他动物第４ 号外显子相对应的一段ＤＮＡ 片段， 大小为３３２ｂｐ。

摘要：根据GenBank中发表的新城疫病毒F48E9基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了该病毒HN基因中两个不交叉的基因片段,长度分别为790bp和579bp。将这两段基因分别克隆到pGEM-T vector中,经酶切鉴定和测序后克隆到原核表达载体pET-28a,PCR和酶切鉴定表明,克隆的两个新城疫病毒基因片段已经正确地插入到了原核表达载体pET-28a之中。

摘要：根据Genebank公布的J04601猪胃蛋白酶原A序列,进行了引物的设计和筛选,通过RT-PCR获得了湖北白猪的胃蛋白酶原A的cDNA序列全长,共1227bp(已提交Genebank,登录号EF108301),其具有一个长度为1158bp的读码框,编码385个氨基酸,其中包含15个氨基酸组成的信号肽,成熟的胃蛋白酶原A由370个氨基酸残基组成。与J04601比较,核苷酸和氨基酸相似性分别为99.3%和98.7%。经PredictProtein分析表明,核苷酸和氨基酸的改变没有造成蛋白质二级结构和功能的变化;并对胃蛋白酶原A基因密码子使用频率和mRNA的二级结构进行了分析,为其载体和宿主的选择以及基因的改造奠定了分子生物学基础。

摘要：根据人血清白蛋白(HSA)基因的第八个外显子区DNA序列及相应cDNA序列和KB小鼠血清蛋白DNA序列设计的一对引物P_1:5'-GGATCCACCAACTTACTTATAGGCG-3'和P_2:5'-AGGATCCTACTTACATGCCCAGGAAG-3'.以人白细胞和KB鼠DNA为模板,在50_(μl)PCR反应体系中,经94℃、lmin,58.5℃,35S,72℃、lmin三个循环.94℃、lmin,57.5℃,40S.72℃、lmin32个循环扩增,获得了约为256bp的单一带DNA,KB鼠无专一带.将人HSA DNA扩增的单一带DNA以BamHI-Sst I位点克隆到pUC19中,得到HSA DNA扩增片段的克隆子.

摘要：设计特异引物,采用RT-PCR技术,成功从本实验室分离、保存的H6N2禽流感病毒毒株(HB 2002)中克隆到血凝素基因(HA)序列,该克隆基因全长1 714 bp,提交GenBank,获得登录号DQ 285546。同部分H6,H5,H7,H9亚型禽流感病毒HA基因序列分析表明,该基因核酸、氨基酸序列与A/duck/Hainan/4/2004(H6N2),A/duck/HongKong/3600/99(H6N2)毒株有99%的相似性;分子进化分析结果显示,该基因与此2毒株亲缘关系最近。由该克隆核酸序列推导的HA蛋白共566个氨基酸,该蛋白同其他H6亚型AIV的HA蛋白有相同裂解位点序列即PQIETR↓G,无高致病性毒株典型的裂解位点特征,因此,初步判定毒株HB 2002为低致病性禽流感病毒。

摘要：从转基因动物研究的目的出发,探讨转基因动物研究的不同思路,分析使用各种载体所考虑的基本出发点,说明受体动物遴选所需要考虑的因素,总结了转基因方法的技术特点,提出转基因动物检测手段的设计原则,论述了转基因动物繁殖的必要性,为从事转基因动物方面的研究提供技术思路。

摘要：根据乙脑病毒基因组3′末端保守区设计一对特异性引物,建立了乙脑病毒不同株的RT-PCR诊断技术。该技术可以从乙脑病毒WHe株、SA14-14-2株、P3株、SA14-14-2VS株接种的鼠脑组织中扩增出486bp的核酸片段,检出的灵敏度约为2pg。对20份临床样品的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但RT-PCR诊断技术可在3h内直接对组织进行诊断,具有敏感、快速、稳定的优点。