摘要：为了建立可对虎DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在野外调查中获得的虎疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的虎产品进行物种鉴定,从Genbank数据库下载5个虎亚种及其它6种猫科动物和6种鹿科动物的mtDNA细胞色素b基因序列,并用Wdnasis(V2 5)软件对上述不同动物的该基因碱基序列进行比较。在此基础上,综合考虑了设计引物的基本原则,选择了虎与其它动物碱基序列上差异位点较多的两个片段,设计出PCR引物(引物1、2)。用该对引物分别对从东北虎、华南虎及8种猫科动物和6种非猫科动物的肌肉、脏器组织、皮或毛发中提取的DNA进行PCR(聚合酶链反应)扩增。结果表明,所设计的引物对虎DNA具有特异性,从而达到了对该物种进行特异性检测鉴定的目的。

摘要：根据GenBank中犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成1对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出约1600bp的片段,将此片段克隆于pMD18-Tsimple载体。经测序分析表明,与其它毒株N基因序列的同源性很高。再将其定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHTa中,转化感受态*** BL21细胞,经IPTG诱导表达分子量约63Ku的重组N蛋白。

摘要：根据Genbank上发表的水貂阿留申病毒基因序列数据，设计了3对引物，采用PCR的方法分别对ADV—DL1、ADV—DL2株非结构蛋白基因进行扩增，将各片断克隆至pMD18-T载体，经PCR鉴定后进行了序列测定和分析。结果显示，ADV—DL1、ADV—DL2与GenBank上公布的ADV毒株相比，核苷酸序列同源率NS1为85．9％-90．0％．Ns2为85．1％-92．7％．NS3为83．0％～95．1％。ADV—DL1与ADV—DL2同源率NS1为93．7％，NS2为95．6％，NS3为98．5％。氨基酸同源率NS1为82．8％-85．8％，NS2为80．7％～92．1％，Ns3为72．9％～95．4％。ADV—DL1与ADV—DL2同源率NS1为90．3％，NS2为92．1％，NS3为95．4％。

摘要：根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1mmol/L的IPTG诱导下,4h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性。

摘要：参照已发表的犬瘟热病毒(CDV)核蛋白基因(N)序列设计合成了1对引物,用RT-PCR方法对从发病狐、貉中分离的MS01、SC01、ZD01三株CDV的N基因进行扩增,并分别将其PCR产物进行克隆和测序。测序结果表明:3病毒分离株N基因阅读框架全长均为1572bp,编码523个氨基酸。利用DNAstar的MegAlign生物软件,将3病毒分离株与Genbank数据库中现有的CDV毒株的N基因序列及推导出的氨基酸序列进行了同源性比较和系统进化树分析,结果发现:3病毒分离株与强毒参考株A75/17等野毒株高度同源,核苷酸同源为96.2%～99.1%,氨基酸同源为96.0%～99.8%,而与疫苗株Onderstepoor相对较远,核苷酸同源为93.6%～94.0%。N基因的系统进化关系分析显示:3病毒分离株均归为强毒株,并且与中国新疆的TN株、中国台湾的Kaohsiung株基因型最近,表现出一定的地理位置相关性。

摘要：2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出F基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株F基因的开放阅读框架(ORF)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。

摘要：根据Genbank上已发表的H4N6亚型的NS基因序列,设计一对特异性引物,成功扩增出一株野鸭源禽流感病毒扎龙分离株A/mallard/ZhaLong/88(H4N6)的NS基因,并将该片段连接到PMD18-T载体上,连接产物转化至DH5α感受态细胞,对目的片段进行测序,获得了NS基因全序列,大小为887bp。该片段的核酸序列与已知的几个毒株序列进行同源性比较,同源性为78.4%～97.6%,推导的氨基酸序列同源性为80.8%～98.6%。

摘要：试验根据GenBank公布的牛源无乳链球菌SIP基因序列设计并合成1对引物,通过PCR扩增获得SIP基因部分扩增产物。序列分析结果表明:SIP基因扩增产物大小为945 bp,编码315个氨基酸残基。标准菌株(+株)与内蒙古分离株(M株)的基因及氨基酸同源性为100%,这2个菌株与Gen-Bank上公布的B群无乳链球菌菌株(DQ914274)SIP基因及氨基酸同源性达到98.94%及99.68%。

摘要：用以选择犬瘟热病毒RNA的有关碱基顺序,设计DNA探针,并在5′末端偶联一个氨基连接分子(Aminolinkl):5′×AGGGCTCA-GGTAGTCCAGCAATG3′,共23个碱基和一个氨基连接分子。NH_2-DNA探针在DNA合成仪上合成。合成产物同生物素酰氨基已酸盐N—羟琥珀酰亚胺酯(Biotinamidocaproate N-hydroxysuccinimide ester)反应,反应物经高效硅胶薄层板纯化,得到生物素标记犬瘟热病毒DNA探针。

摘要：根据GenBank中新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的F基因序列设计了1对特异性引物,成功地对其中一株野鸭源NDV的F基因进行了克隆、测序,并推导其氨基酸序列,选择F基因部分片段绘制了遗传进化树。F基因全长1 662 bp,单一的阅读框架编码553个氨基酸,构成的F蛋白上有13个Cys残基位点和6个潜在的糖基化位点,其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-K-116R-117F。遗传进化分析表明,该NDV分离株为基因Ⅶ型NDV,与近年来我国家禽中所报道的NDV的基因型相一致。