摘要：采用正交设计与单因素结合法,对国兰ISSR-PCR反应体系中的4个因素(dNTPs、引物浓度、Mg2+、Taq DNA聚合酶)进行优化试验,结果用DPS软件进行分析。结果表明:各因素对PCR结果均有显著影响,其中Taq DNA聚合酶对反应的影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立国兰ISSR-PCR的最佳反应体系(25μL)为:dNTPs 0.2mmol/L、引物1.0μmol/L、Mg2+2.5mmol/L、Taq DNA聚合酶1U。

摘要：序列相关扩增多态性(SRAP)是新一代的分子标记技术,尚未在兰花中应用过。本实验运用改进了的CTAB法提取国兰总DNA,并L16(45)正交设计,对影响中国兰PCR反应的4个因素(引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、扩增模版)在4个水平上进行优化试验,结果采用DPS软件分析。结果表明,在25μl总体积中,Taq酶为1个单位的情况下,中国兰SRAP-PCR反应最佳扩增体系为:Mg2+2 mmol.L-1、DNA模版100μg、dNTPs 0.25 mmol.L-1、引物0.3μmol.L-1。这一优化的SRAP-PCR体系的建立为后续国兰SRAP分析奠定基础。