摘要：目的通过克隆EV71病毒结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的重组杆状病毒表达载体。方法设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至含有CMV启动子的杆状病毒穿梭载体pFastBacDual-CMV上,命名为pFBCMV-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经RT-PCR技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,定向克隆至杆状病毒穿梭载体pF-BCMV-IRES的IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠杆菌DH5α中,经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过对重组杆状病毒穿梭载体pFBCMV-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,证明共表达EV71病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒双顺反子穿梭载体构建成功。结论共表达EV71病毒P1和3CD基因重组杆状病毒双顺反子穿梭载体的成功构建,将为下一步制备EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。

摘要：目的:建立麻疹病毒的实时荧光PCR检测方法并应用于临床标本的检测。方法:根据四十年来在我国流行的麻疹病毒M基因序列,设计用于病毒实时荧光PCR检测的引物和探针,建立麻疹病毒实时荧光PCR检测方法。用此法对40例麻疹的病人标本进行检测,并与血清学检测结果比较。结果:通过40例病人标本中实时荧光PCR检测,39份阳性,1份阴性,阳性率97.5%,高于血清学检测(阳性率77.5%)。结论:该方法方便快捷、特异性强、敏感性高,可用于麻疹病毒的快速诊断和分子流行病学调查。

摘要：目的建立人副流感3型病毒的实时荧光定量PCR快速检测方法。方法根据GeneBank数据库中已有的HPIV3型毒株的HN基因核苷酸序列,用DNASTAR生物软件进行同源性分析比较,选出高度保守且特异的核苷酸区域,用Primer5软件设计HPIV3的引物和TaqMan核苷酸探针。建立PCR反应体系,并优化反应条件。结果建立了人副流感3型病毒的实时荧光定量PCR快速检测方法,并有较高的特异性。结论本研究建立实时荧光定量PCR检测方法能快速地检测副流感3型病毒,可以用于临床的早期诊断。

摘要：目的建立风疹病毒的实时荧光PCR检测方法并应用于临床标本的快速检测。方法分析近四十年来流行的风疹病毒E1基因序列,设计用于病毒实时荧光PCR检测的引物和探针,建立风疹病毒实时荧光PCR检测方法。对30例临床诊断为风疹的患者标本进行实时荧光PCR检测,并与血清学检测结果进行比对。结果 30例患者标本中实时荧光PCR检测,27份阳性,3份阴性,阳性率为90.0%,远高于血清学检测(阳性率70.0%)。结论该方法具有方便快捷、特异性强、敏感性高等特点,为风疹病毒的快速诊断和分子流行病学调查提供了技术支撑。

摘要：四川文化产业职业学院文化传播学院现设有新闻采编与制作、网络舆情监测、出版商务、图文信息处理、汉语(网络编辑)5个专业。其中,新闻采编与制作专业是'四川省高职院校省级重点专业'和'四川省普通高等院校卓越新闻传播人才教育培养计划试点专业'。新闻采编与制作专业已入选省级创新发展行动计划项目、网络舆情监测专业优质课程入选行指委创新行动计划骨干专业、新闻采编与制作专业和网络舆情监测专业已立项为为省级优质高职院校培育专业。

摘要：根据GenBank公布的序列设计1对引物扩增O型口蹄疫病毒P12A3C基因并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV内。含有目的基因的穿梭质粒(pShuttle-PAC)线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细菌。利用细菌内同源重组法得到重组腺病毒质粒(pAd-PAC)。在Lipofectamine 2000介导下重组腺病毒质粒转染HEK293细胞得到重组腺病毒(Ad-PAC)。半数组织培养感染剂量(TCID50)测定、免疫荧光试验(IFA)和连续传代后目的基因的PCR扩增,证实重组病毒滴度为105.5TCID50/0.1 mL,重组病毒HEK293细胞中得以表达且遗传稳定性良好;动物试验表明,该重组病毒能够诱导小鼠产生较高水平的针对口蹄疫病毒的特异性抗体;本试验为口蹄疫重组腺病毒活载体疫苗的进一步研究和应用奠定了基础。

摘要：为量化不同光环境对鸟类影响的严重情况,以求在夜景照明设计中通过选择合适的光源和照明方式来保护鸟类栖息地,本文介绍了一种探索光干扰下鸟类行为特征的实验平台的设计方法,包括用于监测光干扰下鸟类行为特征的、可精准实现单一工况的实验箱和光干扰对鸟类行为特征影响的实验研究方法。光干扰实验研究包括实验选址、场地搭建、实验样本的适应性笼养、人工光干扰实验和天然光对比实验、数据收集和数据处理工作。同时,本文建议在数据处理阶段运用一项基于图像识别技术的新型计算机软件,对实验获取的鸟类行为数据进行高效准确地处理,从而代替人为统计的繁琐性。

摘要：参照猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的基因组序列,设计并合成一组引物。从已构建含有猪瘟病毒兔化弱毒株全基因组质粒pMCfT1-6中分别扩增出NS2长1389 bp和876 bp的片段。将扩增的不同长度的NS2基因序列克隆至表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃,1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达。大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子量约为40 ku处出现和预期的目的蛋白分子量相符的条带。Western-blotting检测表明,表达产物能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带,该表达产物主要存在于包涵体中。上述结果为NS2基因表达产物在免疫检测中的进一步应用奠定了基础。

摘要：参照已发表的猪瘟病毒弱毒株的序列,设计7对覆盖全长基因组的引物,通过RT-PCR从感染猪瘟病毒弱毒株的PK-15细胞中扩增得到7个cDNA片段,分别克隆到pMD18-T载体并测序,利用DNASIS软件获得猪瘟病毒C81株全基因组序列(GenBank:AY663656).C81株基因组全长12310nt,只有一个大的开放阅读框,编码3898个氨基酸的聚蛋白.序列分析表明,C81株开放阅读框与其它各毒株核苷酸和氨基酸序列的同源性变化较大,分别为84.4%～99.6%和91.6%～99.4%.同时,我们绘制了26株CSFV ORF的进化树,比较了CSFV 5'非翻译区核苷酸序列并推测其二级结构,发现不同毒株之间存在较大的差异,另外对C81株聚蛋白的功能域和三维结构进行了预测.

摘要：参照已发表的猪瘟病毒弱毒株的序列,设计7对覆盖全长基因组的引物,通过RT-PCR从感染猪瘟病毒弱毒株的PK-15细胞中扩增得到7个cDNA片段,分别克隆到pMD18-T载体并测序,利用DNASIS软件获得猪瘟病毒C81株全基因组序列(GenBank:AY663656)。C81株基因组全长12310nt,只有一个大的开放阅读框,编码;3898个氨基酸的聚蛋白。序列分析表明,C81株开放阅读框与其它各毒株核苷酸和氨基酸序列的同源性变化较大,分别为84.4%～99.6%和91.6%～99.4%。同时,我们绘制了26株CSFVORF的进化树,比较了CSFV5'非翻译区核苷酸序列并推测其二级结构,发现不同毒株之间存在较大的差异,另外对C81株聚蛋白的功能域和三维结构进行了预测。