摘要：目的:探讨去整合素金属蛋白酶9(ADAM9)特异性siRNA对人肾透明细胞癌(RCCC)786-0细胞中ADAM9基因表达及体外侵袭能力的影响。方法:设计合成ADAM9特异性siRNA。将786-0细胞分4组处理,分别为正常对照组(正常培养786-0细胞)、空脂质体转染组、阴性转染组(转染无义siRNA)和ADAM9 siRNA转染组。转染24、48、72 h后,采用RT-PCR法检测细胞ADAM9 mRNA的表达;转染48 h后,采用Western blot法检测细胞ADAM9蛋白的表达,并用Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:转染24、48、72 h后,ADAM9 siRNA转染组786-0细胞ADAM9 mRNA的表达显著低于其他3组(F=47.945、180.456、60.978,P均<0.001);转染48 h后,ADAM9 siRNA转染组786-0细胞ADAM9蛋白表达显著降低(F=142.816,P<0.001),穿膜细胞数显著减少(F=45.389,P<0.001)。结论:ADAM9特异性siRNA能够有效沉默786-0细胞中ADAM9的表达并降低其体外侵袭能力。

摘要：[目的]研究Lemur酪氨酸激酶2(Lemur tyrosine kinase 2,LMTK2)在去势抵抗性前列腺癌(castration resistant prostate cancer,CRPC)中对雄激素受体(androgen receptor,AR)的调节作用并提出可能的作用机制。[方法]设计合成针对LMTK2基因的siRNA(siLMTK2),阴性对照siRNA(NC);采用瞬时转染法将以上siRNA转入前列腺癌PC3细胞,不转染的细胞设置为空白对照(Mock);采用Western blot检测转入LMTK2 siRNA对前列腺癌细胞及空白对照(Mock)中LMTK2蛋白表达的影响;通过克隆形成实验和细胞增殖实验考察沉默LMTK2基因对PC3细胞的肿瘤形成和增殖的影响。[结果]研究发现沉默LMTK2基因后,前列腺癌PC3细胞中LMTK2 mRNA和蛋白质表达水平显著降低;相反地,雄激素相关基因的转录显著升高。另外,LMTK2基因沉默会导致PC3细胞成瘤能力和增殖能力增强,即致癌性增强。[结论]本研究发现LMTK2是一种AR活性的负调节因子,沉默LMTK2基因能上调AR活性从而增强前列腺癌PC3细胞的增殖。这也为CRPC患者的治疗提供了一种新靶标,从而能够采取更有效的治疗方法。

摘要：目的探究尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u PAR)的表达对高侵袭性人膀胱癌细胞系T24体外增殖与侵袭的影响,以及哺乳动物靶向雷帕霉素靶蛋白复合物2(m TORC2)可能的作用。方法设计合成针对u PAR、Rictor、PTEN基因的siRNA和阴性对照NC siRNA。将对数增殖期T24细胞随机分为5组,并设为实验组siu PAR、siRictor、siRictor+siu PAR、siu PAR+si PTEN和对照组NC。用瞬时转染法将以上siRNA及相应组合分别转入5组T24细胞;分别用RT-qPCR和Western blot检测mRNA及蛋白的表达;用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测u PAR siRNA对T24细胞增殖及侵袭的影响。结果 T24细胞中u PAR mRNA和蛋白的表达量显著上调(P<0. 05)。沉默u PAR能够显著下调T24细胞中磷酸化Akt Serine-473(P-Akt S473)的表达量(P<0. 05),并抑制T24细胞的迁移与侵袭(P<0. 05)。敲除PTEN基因的T24细胞中,沉默u PAR基因促进Akt S473磷酸化(P<0. 05)。结论沉默u PAR能够抑制T24细胞的迁移与侵袭,在T24细胞中u PAR可能是m TORC2的上游调控因子。