摘要：目的观察枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))刺激所致的肾小管上皮细胞(HK2)的损伤作用以及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase,AKT)通路蛋白表达的情况。方法孵育HK2细胞,采用H_(2)O_(2)刺激制作损伤模型。根据实验设计分为正常组、LBP对照组、模型组和LBP干预组。正常组:正常孵育;LBP对照组:正常孵育液中滴加LBP;模型组:正常孵育液中滴加H_(2)O_(2);LBP干预组:预先用LBP孵育24 h后再滴加H_(2)O_(2)。H_(2)O_(2)和LBP在孵育液中的含量分别为100μmol/L、100 mg/L。每组均干预24 h。光镜观察细胞形态变化,试剂盒测定其存活率,流式技术仪检验其凋亡率,比色法比较胞质内丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,蛋白印迹评估胞质内B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl 2-Associated X,Bax)、PI3K、AKT以及磷酸化的PI3K(p-PI3K)、AKT(p-AKT)水平。结果正常组和LBP对照组相比,在形态状况、存活率及凋亡率、胞质内MDA、SOD、Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT方面差异均无统计学意义(均P>0.05);模型组与正常组相比,细胞变圆、脱落,存活率[(50.23±3.38)%]降低,凋亡率[(52.49±3.56)%]增加,MDA含量[(4.63±0.69)mmol/L]上升,SOD活力[(9.56±0.71)U/L]下降,胞质内Bcl-2(0.165±0.023)、p-PI3K/PI3K(0.413±0.057)及p-AKT/AKT(0.647±0.063)含量降低,Bax含量(1.058±0.034)升高(均P<0.05);LBP干预组与模型组比较,细胞伸展、脱落少,存活率[(85.31±3.49)%]增加,凋亡率[(24.62±2.97)%]下降,MDA含量[(2.08±0.35)mmol/L]降低,SOD活力[(17.03±1.45)U/L]升高,胞质内Bcl-2(0.854±0.044)、p-PI3K/PI3K(0.718±0.079)及p-AKT/AKT(0.975±0.112)含量增加,Bax含量(0.213±0.023)减少(均P<0.05)。结论LBP能保护H_(2)O_(2)刺激所致的肾小管上皮细胞氧化损伤,增加其存活率并降低凋亡率,减少胞内有害物质,这些均和PI3K/AKT通路的激活紧密相关。

摘要：目的探究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对β淀粉样蛋白1-42(amyloid beta peptide 1-42,Aβ_(1-42))诱导的小胶质细胞增殖、表型和分泌活性的影响。方法体外培养小胶质细胞株BV2,被设计为4组:对照组、Aβ组、LBP组和LBP+Aβ组。对照组:加培养液;Aβ组:加培养液和5μmol/L的Aβ_(1-42);LBP组:加培养液和100μg/mL的LBP;LBP+Aβ组:提前用培养液和100μg/mL的LBP干预24 h,再加入5μmol/L的Aβ_(1-42);4组的干预时间均为8 h。噻唑蓝法估计4组细胞数目的变化情况,血清酶联免疫吸附试验技术测量培养悬浮液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及白介素-10(interleukin-10,IL-10)的含量,免疫印迹技术分析细胞的表面分子白细胞分化抗原86(differentiation antigen 86,CD86)和精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)的含量。结果 LBP组和对照组相比,细胞数目,培养悬浮液中TNF-α、IL-1β和IL-10的含量,细胞CD86和Arg-1的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05);与对照组相比,Aβ组的细胞数目减少,TNF-α(184.98±16.30)、IL-1β(98.30±7.16)的量增加而IL-10(30.53±3.45)减少(t=18.219、12.891、10.721,均P<0.05),CD86(0.932±0.024)增加而Arg-1(0.213±0.013)减少(t=15.658、25.484,均P<0.05);和Aβ组组相比,LBP+Aβ组的细胞数目增多,TNF-α(68.09±7.53)、IL-1β(55.91±5.61)的量减少而IL-10(51.57±5.86)增加(t=15.946、11.415、7.579,均P<0.05),CD86(0.782±0.017)减少而Arg-1(0.402±0.020)增加(t=12.493、19.408,均P<0.05)。结论 Aβ_(1-42)能够诱导小胶质细胞数目减少,促进细胞分泌TNF-α、IL-1β和表达CD86,抑制细胞分泌IL-10和表达Arg-1,而枸杞多糖能够拮抗上述指标的改变。

摘要：介绍橡胶坝的特点及设计、施工质量控制,重点指出日后维护需要注意的问题。