摘要：为探讨导致神经元病理改变的可能机制以进行干预治疗,本研究采用组织学、免疫组织化学、免疫荧光组织化学及免疫印记等技术对C型Niemann-Pick病(NPC)小鼠(npc-1小鼠)的神经病理、细胞骨架蛋白及细胞周期M期标志进行了研究。结果显示:在npc-1小鼠脑干、小脑白质、基底神经节及大脑白质有诸多神经元含脂质沉积并有球状神经轴突形成。这些异常的神经轴突内含有大量的异常磷酸化的细胞骨架蛋白tau及神经丝蛋白NF。M期标志物的存在表明有丝分裂激酶活化参与这一病理结构的形成过程。本文结果提示:神经元骨架蛋白的异常磷酸化对npc-1小鼠神经病理的形成过程有重要作用,有丝分裂激酶异常活化可能导致这些骨架蛋白的异常磷酸化。针对这一发现可设计干预方案来阻止神经元变性过程。

摘要：目的:探讨CDK4在神经系统变性疾病中的作用,并构建携带小鼠CDK4-siRNA的慢病毒载体进行体外研究。方法:设计3个CDK4-siRNA序列和1个无关对照序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA载体。重组质粒经PCR和测序鉴定后,脂质体介导下转染BV-2细胞,Western blot检测CDK4的表达,筛选出干扰效果最佳的pSIH1-siRNA2。将对照序列和pSIH-siRNA2分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。结果:慢病毒感染BV-2细胞后可表达GFP,RT-PCR和Western blot检测CDK4的表达明显下降。结论:成功构建携带CDK4-siRNA的慢病毒载体,体外研究显示其能明显下调CDK4的表达。

摘要：目的为探讨TNF-α在C型Niemann-Pick病(NPC)神经变性中的作用,构建携带小鼠TNF-α-si RNA的慢病毒载体并进行体外研究。方法设计3个TNF-α-si RNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSI H1-H1-copGFP si RNA载体;重组质粒转染293T细胞,通过实时定量PCR检测筛选出干扰效果最佳的TNF-α-si RNA;筛选出的pSI H-si RNA、pSI H-negative分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成慢病毒;慢病毒感染BV-2细胞和星形胶质细胞,采用RT-PCR以及Elisa检测TNF-α-si RNA的沉默效果。结果成功构建携带TNF-α-si RNA的慢病毒载体,滴度达2×108ifu/L;慢病毒感染BV-2和星形胶质细胞,表达GFP且可下调TNF-α表达。结论TNF-α-si RNA能明显下调TNF-α的表达,为研究和治疗神经变性疾病以及TNF-α相关疾病提供了有力的工具。