摘要：经过长期艰苦的努力,终结结核病(End TB)策略在结核病控制中已看到了令人鼓舞的成绩。结核病发现方面,新的诊断工具与技术不断创新更迭,包括新开发的药物敏感性试验、高通量测序技术(NGS)、重组结核杆菌融合蛋白(EC)皮肤试验、超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测(GeneXpert MTB/RIF Ultra),新型结核感染γ-干扰素释放试验(IGRA)、融合大数据智慧化管理的计算机辅助设计与人工智能影像(CAD/AI)等[1],将结核病发现与诊断向前推进一大步。

摘要：目的制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,探讨CFP10-ESAT6融合蛋白在结核分枝杆菌免疫诊断中的应用价值。方法 PCR扩增得到CFP-10、ESAT6基因片断,将其先后克隆入pET-28a表达载体。优化表达条件、用镍亲和层析的方法纯化带His标签的重组CFP10-ESAT6融合蛋白(rCFP10-ESAT6)。制备兔多克隆抗体,建立rCFP10-ESAT6为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以健康者血清为对照,检测170例结核患者血清的抗体。结果重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6靶基因测序结果与预计设计完全一致。融合蛋白在*** BL21(DE3)工程菌中均为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40%。利用金属螯合亲和层析直接纯化重组蛋白,纯度达到95%以上。Western blot分析表明,重组蛋白能与结核患者血清发生特异性免疫结合反应,与健康者血清不发生反应。CFP10-ESAT6的兔多克隆抗体的效价为1∶8 000,CFP10-ESAT6作为包被抗原的检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA最佳包被浓度为0.002μg/mL,患者血清的最佳稀释度为1∶500。检测结果与临床诊断的符合率,ELISPOT>ELISA(rCFP10-ESAT6)>ELISA(kit)。结论CFP10-ESAT6融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原,对结核的诊断具有重要参考价值。

摘要：目的建立一种新的检测结核分枝杆菌复合群的荧光定量试验方法(R/P分析),探讨R/P分析检测临床标本中结核分枝杆菌复合群的应用价值。方法根据结核分枝杆菌复合群基因保守序列设计引物和探针构建质粒标准品。运用R/P分析检测54例确诊结核病人临床样本,检测的结果同时与培养法、荧光定量PCR法进行比较。结果不同临床标本用R/P分析诊断结核病,其敏感性高于荧光定量PCR法和培养法,阳性检出率分别为96.3%、83.3%和55.6%。结论 R/P方法是一种快速、特异的直接检测方法,它可以区分结核分枝杆菌复合群的死菌与活菌,因此可以更好的指导医生进行治疗,更准确地做出公共卫生决策。

摘要：目的评价化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药肺结核的疗效和安全性。方法对203例耐多药肺结核患者，采用1：1随机、平行对照的方法，分为治疗组和对照组，两组患者除采用对氨基水杨酸异烟肼、利福喷丁、左旋氧氟沙星、丙硫异烟胺、克拉霉素和阿米卡星治疗外．治疗组患者加用免疫调节剂母牛分枝杆菌菌苗（***，微卡），对照组患者不加用母牛分枝杆菌菌苗，疗程共18个月。结果治疗结束时（18个月）治疗组和对照组痰抗酸菌涂片阴性同时痰结核分枝杆菌培养阴性（涂阴培阴）分别为74．5％（73／98）和72．5％（66／91），（X^2=0．09，P=0．7599）。两组比较差异无统计学意义。X线影像结果表明，两组的病灶显效率分别为72．5％（71／98）和47．3％（43／91），差异有统计学意义（F=12．52，P=0．0004，P〉0．05）;有效率分别为90．8％（89／98）和82．4％（75／91），差异无统计学意义（X2=2．90，P=0．0886，P〉0．05）;空洞闭合率分别为33．3％（27／81）和22．1％（17／77），差异无统计学意义（秩和检验F=1．52，P=0．1294，P〉0．05）。免疫学指标CD8在治疗6月时治疗组高于对照组，CD3治疗后与治疗前免疫指标差值在3个月和9个有统计学差异外，其余CD4，CD4／CD8，NK细胞，IL-2R各治疗阶段，治疗组与对照组近似，无统计学差异。临床症状咳嗽、咳痰、胸痛、呼吸困难、乏力等症状有改善，治疗组改善程度均大于对照组。结论本研究所设计的方案对耐多药肺结核病均有明确的疗效，具有有效的杀菌、抑菌作用，加用免疫调节剂在促进病灶吸收、症状改善方面有一定的作用。

摘要：目的评价化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药肺结核的疗效和安全性。方法对203例耐多药肺结核患者,采用1∶1随机、平行对照的方法,分为治疗组和对照组,2组患者除采用对氨基水杨酸异烟肼、利福喷汀、左旋氧氟沙星、丙硫异烟胺(Pt)、克拉霉素和阿米卡星治疗外,治疗组患者加用免疫调节剂母牛分枝杆菌菌苗(***,微卡),对照组患者不加用母牛分枝杆菌菌苗,疗程共18个月。结果治疗结束时(18个月)治疗组和对照组痰抗酸菌涂片阴性同时痰结核分枝杆菌培养阴性(涂阴培阴)分别为74.5%(73/98)和72.5%(66/91),(χ2=0.09,P=0.7599)。2组比较差异无统计学意义。X线影像结果表明,2组的病灶显效率分别为72.4%(71/98)和47.3%(43/91),差异有统计学意义(χ2=12.52,P=0.0004,P>0.05);有效率分别为90.8%(89/98)和82.4%(75/91),差异无统计学意义(χ2=2.90,P=0.088 6,P>0.05);空洞闭合率分别为33.3%(27/81)和22.1%(17/77),差异无统计学意义(秩和检验F=1.52,P=0.1294,P>0.05)。免疫学指标CD8阳性原细胞在治疗6个月时治疗组高于对照组,CD3阳性原细胞治疗后与治疗前免疫指标差值在3和9个月差异有统计学意义外,其余CD4,CD4/CD8,NK细胞,IL-2R等免疫学指标在各治疗阶段,治疗组与对照组近似,差异无统计学意义。临床症状咳嗽、咳痰、胸痛,呼吸困难,乏力等症状有改善;治疗组改善程度均大于对照组。结论本研究所设计的方案对耐多药肺结核病均有明确的疗效,具有有效的杀菌、抑菌作用,加用免疫调节剂在促进病灶吸收,症状改善方面有一定的作用。