摘要：目的建立食源性金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素luk-F、luk-S和葡萄球菌A蛋白SPA基因的多重PCR检测方法。方法设计luk-F、luk-S和SPA基因的引物,利用单重PCR方法和测序验证引物的特异性;建立多重PCR快速检测方法,并对方法的特异性进行评价。结果利用单对引物对实验室的多个菌株进行盲筛,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致。多重PCR反应体系:25μl套装反应液2,上、下游引物(20μmol/L)各0.4μl,0.25μl套装反应液1,基因组模板6μl,加超纯水至50μl。扩增条件:94℃预热2 min;94℃保持30 s,54℃保持60 s,72℃保持60 s,34个循环;72℃延伸5 min。结论该方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性,快速简便,可以同时对大量菌株进行筛选。

摘要：建立了快速检测食源性金黄色葡萄球菌(SA)16SrDNA、纤维蛋白结合蛋白(clfa A和clfa B)、纤连蛋白结合蛋白(fnbp A和fnbp B)的多重PCR方法.利用GenBank SA的16SrDNA,clfa A,clfa B,fnbp A和fnbp B基因序列,设计5对特异性引物,建立鉴定SA及分析SA毒素基因的五重PCR方法,并对160株食源SA进行属鉴定和毒素基因检测.结果显示,供试的160株食源SA中葡萄球菌属16SrDNA鉴定均为阳性;4种SA毒素基因检出率由高到低依次为clfa A(91.88%),fnbp A(21.88%),clfa B(19.38%),fnbp B(8.13%).该方法简便、快捷、准确,为食源SA的属鉴定和毒素基因分析提供了快速检测方法,同时可作为食源性疾病事件处理的溯源技术.