摘要：目的:构建Rabex-5 RNAi慢病毒表达载体,并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,观察其对Rabex-5基因的沉默效应。方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性克隆,测序鉴定。用293FT细胞包装产生慢病毒,感染MCF-7细胞,利用Real-time PCR和Western blot鉴定抑制Rabex-5表达的效果。结果:PCR与测序鉴定证实成功构建了Rabex-5 RNAi的慢病毒载体,转染MCF-7细胞后,与未干扰组和阴性对照组相比,Rabex-5的mRNA和蛋白表达下调,以RNAi3的沉默效应最佳。结论:成功构建了Rabex-5 RNAi慢病毒表达载体,其可使MCF-7细胞株Rabex-5表达下调,为进一步研究靶向Rabex-5 RNAi对乳腺癌细胞恶性生物学行为变化及基因治疗研究奠定了实验基础。

摘要：在本次讲座中,厉红元教授首先介绍了带蒂肌皮瓣乳房重建技术在乳房外科实践中的必要性和该手术在国内外的发展现状;接着分别讲解了背阔肌皮瓣和带蒂横行腹直肌皮瓣重建技术的优点和缺点,探讨了如何结合患者乳房体积、职业和手术史正确地选择重建术式以及带蒂肌皮瓣乳房重建技术的相对禁忌证;然后从背阔肌和腹直肌的血管解剖、术前切口设计、术中体位变化、术中血管游离和保护、术中皮瓣塑形等方面分别介绍了2种肌皮瓣手术操作过程中的注意事项;最后着重介绍了术前血管造影和吲哚菁绿荧光显影技术在带蒂横行腹直肌皮瓣乳房重建中的重要性。厉红元教授详细地介绍了2种带蒂肌皮瓣乳房重建技术,为乳腺外科临床医师开展乳房重建工作提供了重要的参考。

摘要：目的通过构建CXCR7短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的真核表达载体,探讨趋化因子受体CXCR7对人乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖、凋亡、周期的影响。方法针对CXCR7构建编码shRNA序列的重组表达载体;分别用RT-PCR和Westernblot检测CXCR7mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖;TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期。结果构建针对CXCR7短发夹状RNA序列的表达载体,经酶切及测序证实与设计完全一致;将2个CXCR7shRNA载体(CXCR7-shRNA1;CXCR7-shRNA2)转染MDA-MB-435s细胞后,CXCR7mRNA及蛋白平均降低;抑制CXCR7的表达后,CXCR7-shRNA组细胞增殖率明显下降(P<0.05),细胞凋亡增多(P<0.05),细胞周期无明显改变。结论重组表达载体CXCR7-shRNA1、CXCR7-shRNA2能有效抑制靶基因CXCR7的表达,进而可抑制人乳腺癌MDA-MB-435s细胞的增殖,促进细胞凋亡,而对细胞周期无明显影响。