摘要：为建立一种可以鉴别布鲁菌A19疫苗株和其他布鲁菌的双重荧光定量PCR方法,分别设计特异性扩增布鲁菌BCSP31基因序列和A19疫苗株缺失序列的2套引物探针,对引物和探针浓度进行优化,并对其敏感性、特异性和重复性进行评价。结果表明,用该方法对2种阳性质粒标准品的最低检测限均为10拷贝/μL;该方法扩增A19疫苗株的核酸时只呈现出1条特异性的扩增曲线,扩增其他布鲁菌菌株(包括疫苗株与野毒株)的核酸时,会出现2条特异性的扩增曲线,而非布鲁菌的细菌核酸均未出现特异性的扩增曲线。该方法的批内和批间重复变异系数均小于3%,重复性良好。对122份临床样品的检测结果显示该方法的阳性样品检出率高于套式PCR检测方法和Bruce-Ladder PCR方法,并可对A19疫苗株的核酸进行鉴别。本研究建立的鉴别布鲁菌A19疫苗株的双重荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,可作为临床上进行A19疫苗株鉴别的一种检测方法。

摘要：组织全国动物疫病预防控制系统的实验室参加检测能力比对,是农业农村部多年坚持的一项常规工作。2020年8—10月,中国动物疫病预防控制中心按照农业农村部关于检测能力比对的工作部署和要求[1],组织全国37个实验室开展了检测能力比对工作,在规定时间内完成了比对方案设计、比对工作实施和比对数据汇总分析及上报。农业农村部对2020年的比对结果进行了通报,对于指导各地实验室查找薄弱环节、完善检测体系建设发挥了重要的推动作用。

摘要：为了建立一种鉴别布鲁菌S2疫苗株和其他种类布鲁菌的双重实时荧光PCR检测方法,通过查阅文献,分别设计了特异性扩增布鲁菌IS711插入序列和S2疫苗株缺失序列的2套引物探针,并对引物和探针浓度进行了优化,对其敏感性、特异性和重复性进行了评价,同时,使用该方法对不同类型的临床样品进行了检测。结果表明,用该方法对2种阳性质粒标准品的最低检测限均为10 copies/μL;该方法能特异性鉴别S2疫苗株,其他非布鲁菌的细菌核酸均未有特异性的扩增曲线;批内和批间重复变异系数均小于3%,重复性良好。对112份临床样品的检测结果显示该方法的阳性样品检出率高于套式PCR检测方法,并可以成功对S2疫苗株的核酸进行鉴别。该研究建立的鉴别布鲁菌S2疫苗株的双重实时荧光PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,具有较好的临床应用价值。