摘要：目的探讨解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)对人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖和凋亡的作用,以及白介素-4(IL-4)对ADAM33表达的影响。方法分别以1、10、50和100 ng/mL浓度的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组作为对照,分别采用Real-Time PCR和Western blotting法检测ADAM33 mRNA和蛋白的表达。设计并合成ADAM33-siRNA,瞬时转染HASMCs,Real-Time PCR法和Western blotting法筛选出抑制率最高的siRNA,以抑制率最高的siRNA瞬时转染HASMCs;MTS和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况。结果当不同浓度的IL-4刺激HASMCs时,ADAM33 mRNA和蛋白的表达均呈浓度依赖性。与对照组比较,IL-4浓度为50 ng/mL组和100 ng/mL组mRNA和蛋白的相对表达量分别增加了5.94、7.6倍和3.72、4.57倍,差异均有统计学意义(P0.05)。在3条干扰RNA中,ADAM33-siRNA-575的抑制效率最高,在mRNA水平的抑制率为81.08%。在24、48和72 h,干扰组的细胞增殖明显低于阴性对照组(P<0.05),增殖抑制率分别为15.38%、32.83%和22.78%;干扰组的细胞凋亡率为(25.88±3.37)%,明显高于阴性对照组的(8.95±0.51)%(P<0.05)。结论 ADAM33可促进HASMCs增殖,而细胞因子IL-4可促进其表达,两者可能在气道重塑中起着重要的作用。

摘要：目的探讨解整合素-基质金属蛋白酶33(ADAM33)在白介素-4(IL-4)刺激的人气道平滑肌细胞(HASMCs)中对NF-κB和TGF-β1表达的影响,为进一步完善哮喘的发病机制提供理论基础。方法以50μg/L的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组为对照,24 h后实时荧光定量PCR法和Western blot法检测ADAM33的表达;设计并合成ADAM33-siRNA,IL-4刺激24 h后瞬时转染ADAM33-siRNA,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测抑制率;并且检测TGF-β1、NF-κB mRNA和蛋白的表达情况。结果 50μg/L的IL-4较对照组明显促进了HASMCs中ADAM33的表达(P<0.05),在mRNA水平表达量增加约4.36倍,蛋白水平增加约3.3倍;ADAM33-siRNA-575明显抑制了ADAM33在HASMCs中的表达;干扰组、阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.602±0.024、1.01±0.176和1.239±0.171,NF-κB mRNA的表达量分别为0.54±0.08、1.014±0.21和1.049±0.378;TGF-β1蛋白的表达量分别为0.227±0.016、0.7±0.048和0.715±0.025,NF-κB蛋白的表达量分别为0.335±0.048、0.922±0.04和0.943±0.046。干扰组TGF-β1、NF-κB不论是在mRNA水平,还是在蛋白水平,均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 ADAM33可能是IL-4调节人气道平滑肌细胞NF-κB/TGF-β1信号通路中的一个关键信号分子,有望成为防治哮喘的重要靶点。