摘要：背景:脊髓损伤后在一定的微环境中有再生的能力。嗅鞘细胞兼具星形胶质细胞和许旺细胞的特性,具有促进脊髓轴突再生的能力。目的:制作成鼠胸髓损伤模型,观察嗅鞘细胞对损伤脊髓轴突再生的作用。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第二医院。材料:实验于2001-01/2002-11在中山大学附属第二医院完成。20只成年SD雄性大鼠,体质量(380±20)g,由中山大学实验动物中心提供(机构许可证号:SYXK(粤)2004-0020)。低糖的DMEM培养液(L-DMEM,GibcoBRL公司)、胎牛血清(Hyclone公司)、MBP(髓磷脂碱性蛋白,Sigma公司)、抗神经生长因子受体抗体(Sigma公司)。应用随机数字表完全随机化分为细胞移植组和对照组,每组10只。方法:将成年SD大鼠麻醉断颈处死,无菌条件下取出完整嗅球分嗅神经。采用改良Allen法打击脊髓建立胸髓损伤模型。细胞移植组于损伤脊髓处注入10μL嗅鞘细胞悬液(2.5×1010L-1),对照组仅注入相同剂量DMEM/F12(1∶1)培养液。移植后6周通过组织学和免疫组织化学方法观察嗅鞘细胞对脊髓轴突再生的影响。主要观察指标:①抗神经生长因子受体抗体染色鉴定嗅鞘细胞。②髓磷脂碱性蛋白染色观察髓鞘的修复。③嗜银染色观察神经轴突再生。结果:细胞移植组有2只动物死亡,对照组有3只死亡,共15只大鼠进入结果分析。①细胞移植组可见损伤脊膜完整,较正常脊髓稍变细。苏木精-伊红染色见损伤区有多极细胞,且与脊髓组织有移行过度现象,说明存活的嗅鞘细胞与宿主融合良好。新生的轴突多呈束状,周围有小圆淋巴细胞浸润。嗜银染色可见再生轴突长入损伤区组织中,多与束状排列的多极细胞伴行;对照组脊髓损伤处明显变细,脊膜尚完整。苏木精-伊红染色见脊髓损伤区未见新生轴突。嗜银染色未见再生轴突。②细胞移植组可见多极细胞,多呈束状排列,胞浆内有大量抗神经生长因子受体抗体阳性颗粒存在,进一步证明嗅鞘细胞移植6周后仍然存活,且与宿主融合良好。髓磷脂碱性蛋白染色见损伤区有呈线状髓磷脂碱性蛋白阳性纤维,提示损伤区两端均有髓鞘样物质产生,且互相靠拢。同时多极细胞中也发现有髓磷脂碱性蛋白阳性物质存在,说明移植的嗅鞘细胞有产生髓鞘样物质的作用。对照组未见轴突再生。结论:嗅鞘细胞延迟植入成鼠打击伤后脊髓后,可存活并产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生。

摘要：背景:此前已有学者从组织学等多角度探讨并进行了可注射复合人工骨作为椎体成形填充剂的实验研究,还需要进一步从术后伤椎轴向承压能力方面探讨此种治疗方法的疗效,以取得在人体上难以得到的直观对比数据。目的:观察在椎体成形术治疗犬胸腰椎骨折过程中植入可注射复合人工骨后伤椎的轴向承压能力。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-09/2009-01在深圳市龙岗区中心医院外科动物实验室完成。材料:脊柱矫形固定器钉棒Ⅰ型、Ⅱ型由天津正天医疗器械有限公司提供。参照尹庆水等提供的方法制备注射型复合人工骨,低温保存备用。其中珊瑚羟基磷灰石颗粒、重组人骨形成蛋白2冻干粉由解放军军事医学科学院提供,2%几丁糖溶液由解放军第二军医大学与上海其胜生物材料研究所联合研制。方法:1岁龄普通级健康家犬20只,随机分为治疗组和对照组各10只,模仿高处坠落致胸腰段受到屈曲压缩暴力进行造模,治疗组采用椎弓根钉棒系统对伤椎进行复位后通过伤椎椎弓根注入复合人工骨行椎体成形治疗。对照组仅采用椎弓根钉棒系统对伤椎进行复位内固定。主要观察指标:术后3个月处死动物,取伤椎及上下椎体段脊柱,在微电脑压力测试试验机上测量椎体中心点最大负载压强。结果:实验组100%伤椎中心点负载压强与同个体上下椎体比较差异无显著性意义,恢复了轴向承压能力;而对照组有60%伤椎中心点负载压强与同个体上下椎体比较差异有显著性意义(P<0.05),未恢复轴向承压能力。结论:采用椎弓根螺钉系统复位内固定及可注射人工骨椎体成形治疗胸腰椎骨折可能会有效地恢复术后伤椎抗轴压能力,从而提高手术成功率。

摘要：背景:胸腰椎骨折后路椎弓根螺钉系统复位后易出现椎体内空壳现象,防止断钉、断杆、螺钉松动、弯曲、Cobb角增加及后期椎体高度丢失等并发症是近年来脊柱外科研究的热点之一。目的:观察椎弓根钉系统复位内固定结合可注射型复合人工骨椎体成形修复胸腰椎骨折的效果。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2005-06/2006-12在深圳市龙岗中心医院骨科进行。对象:胸腰椎骨折患者l7例,男11例,女6例,平均年龄38.2岁。损伤节段:T112例,T125例,L17例,L23例。压缩性骨折9例,爆裂性骨折8例。合并有神经损伤13例。方法:采用椎弓根钉棒系统对伤椎进行复位后通过伤椎椎弓根注入复合人工骨行椎体成形治疗,治疗前后行X射线摄片和CT检查并随访。主要观察指标:①材料与宿主的生物相容性反应。②人工骨吸收情况。③伤椎椎体前缘高度、后凸Cobb角。结果:17例患者均获随访,随访大于10个月。①随访期内无内固定材料松动及断裂现象,椎体高度恢复满意,无再塌陷,人工骨椎体内充填满意,1例发生椎管漏。②CT显示注入椎体内的人工骨均在4个月内吸收。③治疗后伤椎压缩程度和后凸畸形Cobb角明显小于治疗前[(9.79±3.23)%,(51.28±8.67)%,P<0.01;(5.6±3.8)°,(23.4±7.6)°,P<0.01]。结论:采用椎弓根螺钉系统复位内固定及可注射人工骨椎体成形治疗胸腰椎骨折解决了椎体内的空壳问题,减少了修复后并发症的发生,提高了脊柱的稳定性。

摘要：背景:在关节软骨损伤修复的过程中,由于目前实验室中常用的细胞因子存在半衰期短、价格昂贵等缺点,不能广泛应用于临床。目的:假设结缔组织生长因子对体外培养的兔关节软骨细胞增殖和表型有一定的影响,为组织学方法修复关节软骨缺损寻找新的细胞因子。设计、时间及地点:随机区组设计对照实验,于2007-08/2008-02在深圳龙岗中心医院完成。材料:健康1月龄新西兰大白兔2只;结缔组织生长因子为Propetech公司产品。方法:获取兔关节软骨组织,将其剪碎,Ⅱ型胶原酶消化法原代分离培养兔关节软骨细胞,待细胞铺满瓶底80%胰酶消化传代,取其第2代,细胞贴壁后随机分组,实验组分别加入30,50,100,150μg/L的结缔组织生长因子,对照组仅加入DMEM培养液进行体外培养。主要观察指标:采用倒置相差显微镜下观察细胞形态及数量改变,采用四唑盐(MTT)法检测不同浓度的结缔组织生长因子对软骨细胞增殖的影响,免疫组织化学法(SABC法)检测Ⅱ型胶原的表达情况。结果:①结缔组织生长因子作用下的兔关节软骨细胞生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,部分细胞聚集成团,形成软骨结节。②结缔组织生长因子能显著促进兔关节软骨细胞增殖,与对照组相比差异具有显著性意义(P<0.01)。不同质量浓度的结缔组织生长因子均能促软骨细胞增殖,100μg/L为最佳作用质量浓度(P<0.01)。③结缔组织生长因子作用下的兔关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达增多,且始终为阳性。结论:结缔组织生长因子可以刺激体外培养的兔关节软骨细胞增殖,促进软骨特异性Ⅱ型胶原表达,维持软骨表型。结缔组织生长因子可能用来作为组织工程学修复软骨缺损,治疗骨关节炎的新的生长因子。

摘要：目的:研制一种通用型脊髓打击器,并评估其制作脊髓分级挫伤动物模型的稳定性。方法:依据重物坠落致伤原理,设计一种通用型脊髓打击器;将50只SD大鼠,分为3个实验组和1个对照组,实验组应用该打击器以质量为20g的打击棒在不同高度实施打击:12.5mm组(A组,n=12),25mm组(B组,n=12),50mm组(C组,n=14),对照组仅行椎板切除,不打击(n=12),分别于术前、术后第2天、1周至6周进行大鼠BBB运动评分,方差分析比较各组各时间点的BBB评分;术后1周和6周取材行组织学观察,用Photoshop CS软件直方图命令处理连续切片中最大受损面积的图像,计算大鼠脊髓最大受损面积比;对BBB评分与大鼠脊髓最大受损面积比进行相关分析。取4只国产家猪,应用该打击器以50g×150mm打击能量打击后制备胸髓半侧挫伤模型,于术前、术后第2天和第7天行改良Tarlov分级法评价猪后肢功能,并进行组织学观察。结果:通用型脊髓打击器能够准确定点、定高打击制作动物脊髓损伤模型。大鼠分级脊髓挫伤模型在各个时间点上BBB评分差异有统计学意义(P<0.05),A组和B组在术后1周后肢功能有不同程度恢复,而C组至术后6周均无明显恢复,对照组无功能障碍。大鼠和猪脊髓组织学表现均为以打击震中为中心的离心纵向损伤。大鼠脊髓最大受损面积比在各损伤组组内齐同、组间差异有统计学意义(P<0.05),脊髓最大受损面积比与BBB评分呈密切负相关关系(r=0.89807,P<0.001)。猪脊髓半侧挫伤后Tarlov分级法评价显示为中重度损伤。结论:研制的通用型脊髓打击器可成功建立不同损伤程度、稳定性高的大鼠急性脊髓挫伤模型,并可用于建立猪脊髓挫伤模型。

摘要：目的研究人神经干细胞（hNSCs）移植对大鼠脊髓损伤的修复作用，并初步探讨其作用原理。方法分离、培养和鉴定hNSCs。24例成年SD大鼠分为移植组12例和对照组12例，均采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作脊髓损伤模型，第9天移植组于损伤脊髓中心分别注入经CM-DiI标记的hNSCs混悬液，对照组注入人DMEM／F12培养液。术后第4、8周取损伤部位脊髓，免疫组织化学染色检测移植细胞的存活和分化；术后每7天行BBB评分，评定大鼠后肢运动功能恢复情况。数据进行成组设计资料的t检验。结果成功建立hNSCs的体外培养体系；移植的hNSCs在大鼠脊髓内存活超过8周，并向脊髓损伤头尾端迁移，免疫组织化学荧光染色示移植细胞可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞；移植组大鼠BBB评分高于对照组（P〈0．05）。结论移植到大鼠损伤脊髓中的人神经干细胞可分化为神经元和神经胶质细胞，并可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。