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人胰岛素原密码子的优化及其在毕赤酵母中的表达: 收藏
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引用; 《厦门大学学报（自然科学版）》2012年第1期51卷 101-106页; 作者：史莹飞敬科举凌雪萍卢英华厦门大学化学化工学院福建厦门361005; 依据毕赤酵母偏好密码子,设计合成长效人胰岛素原(human proinsulin,HPI)基因序列,所合成的HPI基因全长为200bp,并在其N端添加信号肽(EEAEAEAEPK)以提高目的蛋白表达.将改造后基因克隆到pPIC9K载体中,构建分泌表达型载体pPIC9K-HPI,转...; 依据毕赤酵母偏好密码子,设计合成长效人胰岛素原(human proinsulin,HPI)基因序列,所合成的HPI基因全长为200bp,并在其N端添加信号肽(EEAEAEAEPK)以提高目的蛋白表达.将改造后基因克隆到pPIC9K载体中,构建分泌表达型载体pPIC9K-HPI,转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中.用遗传霉素G418梯度筛选获得高拷贝菌株,在甲醇诱导下表达分子质量为7.87ku的HPI,利用金属螯合层析纯化蛋白质,胰蛋白酶酶切后利用人胰岛素试剂盒测得生物活性,HPI摇瓶最高产量可达35.4mg/L.该研究为获得大量长效胰岛素基因工程产品奠定研究基础.; 来源：详细信息评论

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