摘要：目的构建慢病毒载体及观察其介导的RNA干扰猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因表达情况。方法通过在线软件设计猪c-Fos基因shRNA序列,合成、退火形成双寡链核酸后克隆到PGMLV-SC1载体,测序。用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染293T细胞,包装成4组病毒(shRNA c-Fos1、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos4),并测定滴度。感染猪卵巢颗粒细胞,采用PCR和Western blot检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达。结果重组克隆中插入片段序列与设计的Oligo序列完全一致。滴度为1×108TU/mL,感染复数30时,阴性对照组、实验shRNA c-Fos4、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos1组c-Fos mRNA的表达分别为对照组的0.842 7±0.065 6、0.797 6±0.073 8、0.694 1±0.048 9、0.653 7±0.047 0、0.312 3±0.010 6倍(P<0.05),c-Fos蛋白的表达下降。结论实验shRNA c-Fos1组c-Fos基因下调最明显,成功构建猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因慢病毒RNAi表达载体并筛选出最佳siRNA序列。为c-Fos基因的功能研究提供了研究基础。

摘要：综合主题活动是根据幼儿的兴趣和需要,围绕一个中心话题开展的系列探究活动。活动融合多个领域的教育内容,促使幼儿获得多方面发展,是园本课程建设的重要体现。我园在园本课程建设的探索过程中,吸取众多主题架构方面的经验,建构了选题,了解幼儿已有经验,预设最后希望达到的效果,并确定目标,预设活动周期,最后设计具体的活动内容的主题架构框架。