摘要：目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-202是否通过转录后下调癌基因低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6）的表达而抑制人肝癌细胞（HCC）的增殖.方法 培养HCC细胞株QGY-7703、HepG2;采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白（Cyclin） D1、MYC和LEF1 mRNA的表达;Western blot检测LRP6、Cyclin D1、MYC、β-连环蛋白（β-catenin）和磷酸化Rb蛋白的表达;通过转染小干扰RNA （siRNA）抑制肝细胞癌（HCC）细胞LRP6的表达;构建pGL3-LRP6-3＇端非编码区域（3＇-UTR）-荧光素酶质粒转染HCC细胞作荧光素酶检测;采用噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验及贴壁不依赖性生长能力测定法检测HCC细胞的增殖能力.结果 在QGY-7703、HepG2两种细胞株均显示,过表达miR-202可以下调LRP6的表达,而抑制miR-202可以上调LRP6的表达（P＜0.05）;miR-202的过表达可以降低pGL3-LRP6-3＇-UTR-荧光素酶报告基因中荧光素酶的活性,而抑制miR-202则可以增加其荧光素酶的活性（P＜0.05）;miR-202可以显著下调受Wnt/β-catenin调控的下游基因Cyclin D1、MYC和LEF1的表达,抑制miR-202则可以显著上调这些基因的表达（P＜0.05）;在miR-202过表达的HCC细胞,Cyclin D1、MYC、LEF1和磷酸化Rb蛋白的表达也显著下调,而抑制miR-202的表达,则可以上调这些蛋白的表达（P＜0.05）;miR-202的表达与LRP6蛋白的表达水平呈显著负相关（r =0.575,P＜0.05）;通过MTT法和克隆形成实验结果表明,沉默miR-202抑制组或阴性对照转染组细胞的LRP6,可以降低HCC细胞的生长速度和增殖（P＜0.05）;贴壁不依赖性生长能力测定也显示,LRP6抑制对miR-202抑制组HCC细胞的增殖具有显著抑制作用（P＜0.05）.结论 在HCC细胞,LRP6mRNA是miR-202的直接作用靶点;在miR-202发挥抑制HCC细胞增殖的作用中,LRP6抑制是必不可少的;LRP6可以作为HCC的潜在治疗靶点.

摘要：背景:肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞受到增殖和凋亡的双重调控。肝大部切除后,余肝经历缺血再灌注损伤,其肝再生受到明显抑制,缺血预处理可减轻此损伤,促进肝再生,其机制是否也与这有关,目前未见相关报道。目的:探讨缺血预处理对大鼠自体肝移植后余肝肝细胞凋亡和增殖的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-09/2007-07在中南大学湘雅医学院实验动物中心完成。材料:雄性SD大鼠144只,随机分为3组:单纯肝叶切除组、自体肝移植组、缺血预处理组,48只/组。方法:单纯肝叶切除组大鼠只行肝左、中叶切除,不阻断肝右、尾叶血流。自体肝移植组大鼠结扎切断肝后与食管腹段之间的静脉交通支,游离liberate尾状叶,游离第一肝门、肝上及肝下下腔静脉后,阻断并经门静脉持续低温灌注保存液,同时进行无血肝切除(切除肝左、中叶),肝脏在体持续低温灌洗15min。解除肝门阻断,完全恢复肝脏血流。快速复温肝脏表面,并冲洗腹腔,缝合关腹。缺血预处理组大鼠在门静脉灌注前先阻断肝右、尾叶血流10min,然后开放血流10min,余步骤同自体肝移植组。各组大鼠分别于肝叶切除后0,1,3,6,12,24,48,72h时取材。主要观察指标:生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶及天冬氨酸氨基转移酶的水平,流式细胞仪检测肝细胞凋亡指数,通过Ki-67抗原的表达检测肝细胞增殖情况。结果:与自体肝移植组比较,除肝叶切除后0h外,其余各时间点单纯肝叶切除组、缺血预处理组血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平均明显降低(P<0.05)。各组在肝叶切除后0h(即正常肝组织)基本不存在凋亡细胞;单纯肝叶切除组肝大部切除后余肝肝细胞凋亡指数稍有升高;自体肝移植组复灌注后肝细胞凋亡指数急剧升高,约在12h达到高峰,而后逐渐下降;与自体肝移植组比较,缺血预处理组肝细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。各组Ki-67表达率在肝叶切除后均明显升高,约在24h达高峰,而后逐渐下降。与单纯肝叶切除组比较,自体肝移植组Ki-67表达率明显降低(P<0.05);与自体肝移植组比较,缺血预处理组Ki-67表达率明显增高(P<0.05)。结论:缺血预处理可减轻自体肝移植后肝缺血再灌注损伤所致肝细胞凋亡,促进肝细胞增殖,这可能是其促进肝再生的机制之一。

摘要：目的开发肾移植组织配型管理软件并观察其临床实用性。方法参考氨基酸残基配型及致敏性错配制定配型标准,采用Powerbuild系统编制同种异体肾移植组织配型管理软件,观察肾移植术前快速组织配型分析的可行性。结果从筛选最佳供受者到列表打印结果仅需数分钟,历史数据可查询,界面简单,结果准确、可靠。配型标准可自行更改。结论经国内8家移植中心使用,证明该软件设计科学合理,操作简便,运行稳定,实用性强,具有一定的推广价值。

摘要：应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Rap1基因的表达,构建Rap1 shRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,观察其对小鼠肝脏细胞中Rap1 mRNA和蛋白表达的干扰作用.根据小鼠Rap1 mRNA的全序列,设计了3种Rap1 siRNA序列(Rap1 siRNA1、Rap1 siRNA2、Rap1 siRNA3)和阴性对照序列(HK);采用克隆技术,将其插入带有报告基因绿色荧光(EGFP)的pGenesil-3载体,构建Rap1 shRNA表达载体;经双酶切和测序证实Rap1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;昆明小鼠40只,体重18～20g,随机分成4组:Ⅰ组(转染HK组)﹑Ⅱ组(转染Rap1 shRNA1组)﹑Ⅲ组(转染Rap1 shRNA2组)﹑Ⅳ组(转染Rap1 shRNA3组).于0﹑16﹑24h腹腔内注射Rap1 shRNA2.0～2.5mg/kg(用PBS稀释至1mL);48h后收集小鼠肝脏,用显微荧光﹑定量RT-PCT﹑免疫组化检测小鼠肝细胞中Rap1shRNA的转染率﹑Rap1基因表达以及蛋白质表达水平.Ⅰ组﹑Ⅱ组﹑Ⅲ组﹑Ⅳ组小鼠肝脏细胞体内转染率均大于60%,Ⅱ组﹑Ⅲ组﹑Ⅳ组的Rap1 mRNA表达﹑Rap1蛋白表达均降低,其中Rap1 shRNA1干扰效果最佳.

摘要：背景:移植后急性排斥反应是制约国内肝移植发展的主要障碍之一。目的:探索同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立方法。设计、时间及地点:病理学水平的实验方法改进,于2007-06/2008-11在中南大学实验动物学部完成。材料:供体选用SD大鼠,雌雄不拘;受体选用雄性Lewis大鼠,供受体各120只。方法:采用改良Kamada’s二袖套法,并在此基础上加以改良:肝上下腔静脉重建采用改良连续缝合;支架法重建肝动脉,肝脏灌注采用全自动静脉输液泵控制,建立同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型。共实施大鼠肝移植120例,其中定型手术80例。主要观察指标:移植手术时间,移植成功率,大鼠精神状态,对刺激的反应,活动及进食情况,急性排斥反应Banff评分。结果:80例定型手术中,供肝热缺血时间为0～2min,冷缺血时间为80min,无肝期平均为16～21min,手术成功率为85%(68/80)。急性排斥反应出现于移植后第3天,表现为食欲不佳、精神萎靡;移植后第5天出现局部黄染;移植后第7天黄疽进行性加重,并出现明显腹水和死亡。移植后第3,5,7天的急性排斥反应Banff评分分别为3.98,4.96及6.03。结论:同种异基因大鼠采用改良Kamada’s二袖套法、重建肝动脉、改进肝上下腔静脉缝合及肝脏灌注方法可建立稳定的大鼠肝移植急性排斥反应模型。