摘要：根据大肠杆菌密码子偏好性,优化人胰岛素原基因序列,同时用2个赖氨酸取代C链。重叠PCR扩增法克隆优化的类人胰岛素原基因,PCR扩增引物中引入胰蛋白酶酶切位点和核酸限制性内切酶识别位点。经酶切、拼接获得类人胰岛素原多拷贝基因,并构建人胰岛素原基因多拷贝原核表达载体,转化感受态大肠杆菌诱导表达融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE电泳,考马斯亮兰染色和融合蛋白染色条带光密度分析表明,含有4拷贝的类人胰岛素原重复基因序列原核表达载体的诱导表达类人胰岛素原效率最高,是单拷贝类人胰岛素基因原核表达载体表达效率的3倍左右。表达产物经质谱鉴定,确定为优化设计的类人胰岛素原,表明构建的多拷贝类人胰岛素原基因表达载体可应用于后续人胰岛素原的高效表达生产研究。

摘要：为培养学生的岗位职业能力,实现与岗位零对接,基因工程综合实训以工作任务为线索确定教学内容,以产品生产流程为载体设计教学过程,以职业能力为依据改革教学方法,以发展性评价为手段,强化技能形成。实践证明,"基因工程综合实训"教学改革,有利于培养学生的动手能力和实践创新能力,有利于促进以职业能力培养为核心的教育。

摘要：克隆人胰岛素原基因,通过密码子优化和融合蛋白化学水解位点和纯化标签优化,构建人胰岛素原高效原核表达系统,为重组人胰岛素原的高效表达纯化制备奠定基础。根据大肠杆菌密码子偏好性优化设计人胰岛素原基因,通过PCR技术获得重组基因,构建原核表达载体pET-32a-proinsulin,转化大肠杆菌表达株*** BL21,筛选人胰岛素原高效表达菌株,建立诱导表达和纯化融合蛋白技术方法。克隆获得优化的人胰岛素原重组基因,构建原核高效表达载体,获得优化的诱导表达方法和纯化的人胰岛素原。该研究为建立胰岛素高效制备的优化条件奠定基础。