摘要：目的泡膜蛋白1(vacuole membrane protein-1,VMP1)是近年来新发现的一个重要功能的抑癌基因。为明确VMP1在结直肠癌中的功能和意义,本研究通过慢病毒载体沉默结直肠癌细胞系SW480中VMP1基因的表达,探讨VMP1基因沉默后对结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测5种结直肠癌细胞系中VMP1的表达状况;设计人VMP1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染VMP1高表达的结直肠癌细胞系,运用蛋白质印迹法鉴定其对VMP1基因的沉默效果;VMP1基因沉默后,通过MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 VMP1在5种细胞系中存在差异性表达。具有低转移潜能的HT-29和SW480细胞与具有高转移潜能的LoVo、RKO和SW620细胞相比,有更高的VMP1表达水平,其中mRNA表达差异有统计学意义,t=3.88,P=0.005;而蛋白表达差异有统计学意义,t=14.29,P<0.001。选取低转移细胞株中VMP1表达相对较高的SW480细胞作为研究对象,构建VMP1shRNA慢病毒载体沉默SW480细胞中VMP1的表达。蛋白质印迹结果提示,VMP1稳定沉默的SW480细胞构建成功。在稳定沉默VMP1基因后,MTT法显示SW480细胞的增殖速度在24和48h显著升高,F值分别为79.77和12.35,P值分别为<0.001和0.025。软琼脂克隆形成实验结果显示,SW480细胞的集落数目显著增多,F=75.23,P<0.001。二者均表明SW480细胞增殖能力增强。流式细胞技术检测显示,VMP1基因沉默后可抑制SW480细胞凋亡,F=84.44,P<0.001。Transwell迁移实验结果显示,VMP1沉默后SW480迁移能力增强,F=155.90,P<0.001。结论 VMP1基因可能与结直肠癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了结直肠癌的发生、发展。

摘要：目的设计并合成NO供体型法尼基硫代水杨酸(FTA)衍生物,以期获得抗肺癌活性比FTA更强的化合物。方法将NO供体呋咱氮氧化物通过连接基团与FTA的羧基连接制得NO供体型FTA衍生物。测试目标物体外对肺癌细胞增殖的抑制作用和NO的释放情况,同时测定活性化合物对Ras蛋白的抑制活性。结果合成了8个结构新颖的NO供体型FTA衍生物,其结构经IR、MS和1H-NMR谱确证。大部分目标物对肺癌细胞增殖的抑制活性明显高于FTA,其中,化合物10b、10d和10e比阳性对照药索拉菲尼(sorafenib)稍强或者与其相当。NO释放研究表明,细胞毒性较强的化合物释放NO的量相对较多,而活性较弱的化合物释放量较少。化合物10b对Ras下游信号通路phosphor-Akt、phosphor-ERK和phosphor-Raf抗体的表达有很好的抑制作用。结论法尼基硫代水杨酸与呋咱氮氧化物的杂合物具有较强的抗肺癌活性,值得深入研究。

摘要：目的通过慢病毒载体沉默心肌细胞细胞系H9C2中C-SKI(c-ski)基因的表达,探讨C-SKI基因沉默后对心肌细胞细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹方法检测SW620,HT-29,LoVo,H9C2及RKO细胞系中C-SKI的表达状况;设计人C-SKI基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染C-SKI高表达的心肌细胞细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对C-SKI基因的沉默效果;C-SKI基因沉默后通过MTT实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 C-SKI在H9C2中高表达,构建C-SKIshRNA慢病毒载体沉默H9C2细胞中C-SKI的表达,蛋白质免疫印迹结果提示,C-SKI稳定沉默的H9C2细胞构建成功。在稳定沉默C-SKI基因后,MTT法显示C-SKI沉默不会影响细胞的增殖能力。细胞小室实验结果显示,C-SKI沉默后H9C2侵袭和迁移能力均增强(P<0.001)。结论C-SKI基因能够一定程度上抑制心肌细胞的迁移和侵袭,进而参与了心肌细胞纤维化的发生发展。