摘要：目的 应用基于聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）的基因定点诱变技术（sitedirected mutagenesis,SDM）制备s、Oka血型等位基因检测对照品.用多重聚合酶链反应（multiplex PCR）技术建立3种血型Fy2、s和Ok2的基因分型方法,以了解这3种血型在中国随机献血者中的多态性分布状况.方法 采用基于PCR的基因定点诱变技术对s和Oka血型等位基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点构建了含有突变SNP位点（GYPB基因cDNA 153位C/T突变和BSG基因cDNA 274位G/A突变）的标准质粒,作为s和Oka血型等位基因检测的对照品.同时针对血型抗原Fya、s和Oka等位基因的SNP位点设计序列特异性（sequence specific primer,SSP）引物,构建多重PCR体系,对438份随机献血者样本进行Fya、s和Oka血型抗原的基因筛选.结果 成功应用定点诱变技术完成了s和Oka基因检测中等位基因对照品的制备,并建立了可同时检测Fya、s和Oka血型的多重PCR体系,438份随机献血者样本中共检出2例Fy（a-）样本,未检出s-和Ok（a-）样本.结论 基于PCR的基因定点诱变技术能够得到难以获得的血型基因检测等位基因对照品,用于验证基因分型方法.本实验建立的多重PCR体系是一种有效的进行Fya、s和Oka血型基因检测的方法.

摘要：目的利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,在K562细胞系中敲除编码Vel血型抗原的SMIM1基因。方法设计5条sgRNA序列,构建Cas9-sgRNA共表达质粒,在293T细胞中初步筛选切割效率较高的sgRNA序列。将筛选后的sgRNA通过第二代慢病毒包装系统包装慢病毒并感染K562细胞,提取细胞基因组DNA,进行Sanger测序和TA克隆检测。结果使用易转染的293T细胞建立sgRNA的初步筛选平台,筛选出切割效率较高的sgRNA4序列。CRISPR/Cas9系统成功在K562细胞中SMIM1基因的sgRNA4识别位点发挥基因编辑活性。结论证实了利用CRISPR/Cas9技术在K562细胞中敲除SMIM1基因的可行性,为构建Vel抗原表型阴性的细胞模型奠定基础,也为后续编辑其他血型抗原的基因提供实验依据。

摘要：目的建立筛选稀有血型抗原K、Yt^b的多重PCR体系，了解这两种血型抗原在维吾尔族人群中的分布情况。方法针对血型抗原K、Yt^b的编码基因KEL和ACHE单核苷酸多态性位点设计序列特异性引物，通过优化PCR反应条件，构建可同时检测K、Yt^b血型抗原的多重PCR体系，用该体系对362份新疆维吾尔族随机献血者样本进行相应抗原筛选，并对筛选到的稀有样本进行杂合性分析。结果成功构建可同时检测低频血型抗原K、Yt^b的多重PCR体系，362份维吾尔族样本中共检出9例K＋k＋，41例Yt（a＋b＋），4例Yt（a—b＋）。结论建立的检测K、Yt^b血型抗原的多重PCR体系简便有效。通过筛选所获得的维吾尔族稀有血型数据，可为临床输注配合性血液提供参考资料。

摘要：目的建立可同时检测低频血型抗原等位基因Fyb和S,并且可进行多个标本混合检测的多重PCR基因分型方法。方法针对血型抗原Fyb和S等位基因的单核苷酸多态性(SNP)位点分别设计序列特异性引物,建立稳定的多重PCR体系。通过优化引物设计及PCR反应条件,提高多重PCR反应的灵敏度,使其可同时检测5份DNA标本。应用多重PCR体系,以每5份标本混和检测的方式,对4490份随机献血者标本进行Fyb和S血型抗原基因分型。通过单独的PCR-SSP验证方法,分别检测多重PCR中阳性标本的高频等位基因Fya或s,从而获得稀有血型表型Fy(a-b+)或S+s-。

摘要：目的建立可同时检测血型抗原Dib、k、Jsbl910、Jsb2019的一套稳定的基因分型方法，通过筛选获得所检测人群的稀有血型数据，可扩大中国稀有血型资料库。方法应用基于PCR的基因定点诱变技术制备Dib、k、Jsbl910、Jsb2019血型等位基因检测对照品。分别针对血型抗原Dib、k、Jsbl910、Jsb2019等位基因的单核苷酸多态性位点设计序列特异性引物，通过优化PCR条件建立多重PCR体系，并对4190份随机献血者样本进行Dib、k、Jsbl910、Jsb2019血型抗原基因分型。结果成功制备出Dib、k、Jsbl910、Jsb2019基因检测对照品，并成功构建检测血型抗原Dib、k、Jsbl910、Jsb2019的多重PCR体系，所建立的多重PCR体系具有良好的重复性和稳定性，4190份随机献血者样本中共检出2例Di（b-）样本，未检出k-和Js（b-）样本。结论多重PCR具有快捷、高通量且成本低的优点，可用于筛选稀有血型。获得的稀有血型可存入稀有血型数据库，为稀有血型患者及长期输血患者提供相配合的血液，减少输血不良反应的发生。

摘要：目的通过分子生物学方法，筛选广西壮族随机献血者样本中的Fy（a-）、s-、k-、Di（b-）、Js（b-）表型，获得壮族稀有血型资料，丰富中国稀有血型库。方法基于血型抗原Fyb、S等位基因单核苷酸多态性位点，设计序列特异性引物，优化PCR条件，建立多重PCR体系I；并使用筛选稀有血型等位基因Dib、k、Jsb1910、Jsb2019多重PCR体系Ⅱ共同对4490份广西壮族随机献血者样本进行筛选。结果成功构建检测血型抗原Fyb、S的多重PCR体系I，经验证多重PCR体系I具有良好的准确度和稳定性。使用多重PCR体系I和Ⅱ在4490份广西壮族随机献血者样本中共检出5例Fy（a-），3例S（-）及2例Di（b-）。结论多重PCR能够用于稀有血型的大规模筛选，获得的广西壮族人群稀有血型样本丰富了稀有血型数据库，为临床输注配合性血液提供了宝贵资料。

摘要：目的利用多重PCR筛选技术建立PCR-SSP反应体系同时扩增Co(a-)、Lu(b-)、Yt(a-)、Kp(b-)或s-、Fy(a-)、OK(a-)或k-、Js(b-)、Di(b-)阴性稀有血型。方法根据Co(a-)、Lu(b-)、Yt(a-)、Kp(b-)或s-、Fy(a-)、OK(a-)或k-、Js(b-)、Di(b-)的血型基因核心序列设计相应引物,采用序列特异引物引导的PCR反应(PCR-SSP)体系对献血者模版DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据是否扩增出目标片段图谱判断该稀有血型基因的存在。结果随机抽取本站2010年6月～2011年9月参加献血的3394名献血者进行筛选鉴定,没有发现相应的阴性的稀有血型。