摘要：为提高脂肪酶的热稳定性,作者利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体外定点突变,构建了P197E(即将第197位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E。将该质粒电转化至毕赤酵母Pichiapastoris GS115中,进行异源表达。与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8的酶学性质比较,结果表明:叠加突变体PEL-ep8-P197E在40°C温育处理30min后,残余酶活分别比野生型PEL和随机突变体PEL-ep8提高了42.13%和37.3%。叠加突变体PEL-ep8-P197E的Tm值为41.51°C,比野生型酶PEL提高了2.81°C,比随机突变体脂肪酶PEL-ep8提高了2.25°C。通过对脂肪酶PEL的叠加突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料。

摘要：以带有野生型扩展青霉碱性脂肪酶cDNA全长的载体psk-lip07为模板,利用易错PCR技术以及高通量筛选,最终获得了一株最佳突变体GS-pPIC3.5K-lip07-ER04,其最适作用温度比野生型提高10℃,酶活提高了约22%,热稳定性Tm值也提高了3.28℃。基因测序结果表明,脂肪酶(PEL)第82位的Lys突变成Arg,第241位的Glu突变成Pro。

摘要：Pseudomonas sp. RT-1是从低温环境下分离的低温脂肪酶产生菌,对该菌产生的胞外脂肪酶（PL-1）进行纯化,并对其酶学特性进行初步研究。Pseudomonas sp. RT-1的发酵上清液经60%（NH4）2SO4沉淀、12~14000截留相对分子质量（MWCO）透析袋透析、Sephadex G75分子筛和超滤浓缩后,得到了电泳纯的P-L1。SDS-PAGE电泳估算其表观相对分子质量为4.43×104。对其酶学特性研究表明：PL-1是低温碱性脂肪酶且对有机溶剂的耐受性较好。10~40℃内有较好的催化活性,最适作用温度为18℃;0~50℃该酶的稳定性较好,当温度超过50℃时则容易失活;最适作用pH为10.2,且pH在9~11时较稳定;该酶对有机溶剂的耐受性较好,10mmol/L的Ca2＋、K＋、Na＋和Fe3＋对PL1的酶活力有促进作用,其中Ca2＋促进作用最大,提高了146.07%,而10mmol/L的Cu2＋、Co2＋、Mn2＋、Mg2＋、Zn2＋、Ba2＋和Al3＋对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Al3＋抑制作用最强,抑制了98.55%;PL-1对C链长度小于或等于12的短链脂肪酸形成的甘油三酯具有较强的水解能力;1mmol/L的去氧胆酸盐（desoxycholate）和0.01%的Triton X100对酶活力具有提高作用,分别提高了30.74%和11.83%;0.01%的SDS和Tween-80、1mmol/L的EDTA和尿素对酶活都有抑制作用,其中EDTA的抑制作用最大,抑制了80%。