摘要：目的探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默人蛋白激酶Cδ(PKCδ)对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法根据Genbank数据库中PKCδ序列,设计、合成互补并特异性编码其shRNA序列(PKCδ-shRNA-1和PKCδ-shRNA-2),克隆至pRNA6.1-Neo质粒载体后采用Western blotting检测PKCδ蛋白水平,筛选抑制效果最好的shRNA片段转染骨肉瘤干细胞(转染组),设阴性对照组(转染shRNA无意义随机阴性对照序列)和空白对照组(不行转染处理)。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染后的细胞凋亡和细胞周期情况,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因的表达,采用Western blotting检测各组转染96 h后PI3K/Akt及Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白的水平。结果转染PKCδ-shRNA-1和PKCδ-shRNA-2后PKCδ蛋白水平均降低(P<0.05),且PKCδ-shRNA-1的抑制效果优于PKCδ-shRNA-2,故后续实验选择PKCδ-shRNA-1;与其余两组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bax、Bad的mRNA水平均升高,而Bcl-2水平降低,且在细胞周期上,G_0/G_1期细胞比例升高,但S期和G_2/M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);转染组PI3K/Akt通路中的PTEN水平升高、Akt水平降低,Wnt/β-catenin通路中β-catenin、C-myc和Cyclin D1水平均降低(P<0.05)。结论通过shRNA抑制PKCδ基因表达可抑制骨肉瘤干细胞增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号通路激活有一定抑制作用,可能对骨肉瘤的防治有一定价值。