摘要：目的构建靶向EZH2基因的短发夹RNA（shRNA）重组表达载体，探讨抑制EZH2基因表达对结直肠癌细胞增殖的影响。方法根据EZH2cDNA序列设计具有短发夹结构的DNA序列，构建重组表达载体，鉴定后转染至swg80细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测EZH2基因的抑制效果，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测EZH2抑制对SW480细胞增殖的影响。结果EZH2基因shRNA表达质粒转染48h后，基因沉默组和阴性对照组细胞中EZH2mRNA的相对表达水平分别为0．339±0．013和1．968±0．072，EZH2蛋白的相对表达水平分别为0．229±0．008和1．1684-0．053，基因沉默组均明显低于阴性对照组（P〈0．01，P〈0．05）。转染后48、72h，细胞生长抑制率分别为30．7％和25．9％，与空白对照组比较细胞生长受到明显抑制（P〈0．05）。结论靶向EZH2基因的shRNA重组表达载体构建成功，并能显著抑制EZH2基因的表达。沉默EZH2基因能明显抑制结直肠癌细胞的增殖。

摘要：目的构建zeste基因增强子同源物2(EZH2)靶向的小发夹RNA(shRNA)重组表达载体,探讨抑制EZH2基因表达后其在结直肠癌细胞中的作用。方法根据EZH2cDNA序列设计具有短发夹结构的两条DNA序列,与载体pGFP-V-RS构建重组表达载体,鉴定后转染至SW480细胞。将其随机分为阴性对照组和基因沉默组,RTPCR和蛋白质印迹法检测抑制效果,MTT法检测细胞增殖情况。结果成功构建了抑制EZH2基因表达的干扰质粒。阴性对照组EZH2 mRNA的表达是基因沉默组的5.8倍(P<0.01),基因沉默组EZH2的蛋白明显低于阴性对照组(P<0.05)。与阴性对照组相比,基因沉默组细胞生长受到明显抑制(P<0.05)。结论 EZH2靶向shRNA重组表达载体构建成功,并能显著抑制EZH2基因的表达,为进一步研究EZH2基因在肿瘤中的作用机制提供了基础。