摘要：波尔卡,一个风行世界的时尚符号,从起源于中欧波希米亚人的音乐和舞蹈到音乐大师施特劳斯的不朽名作,从欧洲的旅游节到美国的波尔卡狂欢,从服装设计到建筑艺术,在全世界,波尔卡代表了成功、快乐和节日。

摘要：目的:探讨E2F1对XRCC1启动子的调节作用及其意义。方法:PCR扩增XRCC1启动子序列克隆至pGL3-Basic荧光报告载体上,与E2F1或突变的E2F1(132E)表达载体分别同时转染Sao2细胞;从基因Bank中调取XRCC1启动子序列和E2F结合位点序列分析其相关性;设计引物逐渐从5′端删除与E2F结合位点相关的序列,将PCR产物分别克隆至pGL3-Basic荧光报告载体上,转染至Sao2细胞。细胞裂解后与β-gal反应液一同保温,570nm处读取吸光度值。结果:XRCC1与E2F1共转染后,可以诱导XRCC1荧光强度的增加;XRCC1启动子序列5′端-819～-803与E2F结合位点相关,删除5′端序列使荧光强度减少。结论:E2F1作用于XRCC1启动子序列,上调XRCC1转录。

摘要：目的建立检测人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的多重巢式PCR（nPCR）和多重逆转录PCR（RT-PCR）方法。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物，分别建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIV RNA的多重RT—PCR方法；以建立的PCR方法对150例HIV抗体阳性患者及50例阴性患者进行检测，以ELISA／免疫印迹实验（Westen blot，WB）相结合的抗体检测结果（ELISA／WB）为金标准，计算所建立的PCR方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性、可重复性；分别用建立的多重nPCR和多重RT-PCR检测73份阳性标本，并与HIV-1核酸序列扩增技术（NASBA法）进行检测敏感度的比较；对43份检测阳性的DNA标本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为98．0％（147／150），多重RT—PCR的敏感度为91．3％（137／150），2种方法的特异度均为100％（50／50），多重nPCR和多重RT—PCR的阳性预测值分别为98．0％（147／150）和91．3％（137／150），阴性预测值均为100％（50／50），准确性分别为98．5％和93．5％。可重复性分别为96．7％（87／90）和93．3％（84／90）；多重nPCR的检测敏感度（97．3％）高于NASBA法（72．6％），差异有统计学意义（X^2=17．34，P〈0．01），多重RT—PCR的检测敏感度（79．5％）与NASBA法相比，差异无统计学意Y-（X。=0．94，P=0．332）；检测的43份HIV DNA阳性标本分别为37份B’亚型、5份AE亚型和1份BC亚型。结论成功地建立了多重nPCR和多重RT—PCR方法，操作简便、价格低廉，具有较高的敏感度和特异度和可重复性，能覆盖我国最主要的流行病毒株。

摘要：目的建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT-PCR)方法。将其与已经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较;探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响;评价该方法用于我国HIV-1感染者诊断的价值。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物,建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIVRNA的多重RT-PCR方法;分别以建立的PCR方法和NASBA法对119例HIV阳性患者进行检测,比较2者的检测敏感性;将患者分为不同的病毒载量组,比较PCR方法在各组患者中的检测敏感性差异;使用建立的PCR方法对10例可疑急性感染者进行检测;扩增HIV-1膜区C2-C3段,对nPCR检测阳性的43例DNA样本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为97.5%(116/119),多重RT-PCR的敏感度为78.2%(93/119),2者的特异度均为100%(50/50),多重nPCR和多重RT-PCR的阳性预测值分别为97.5%(116/119)和78.2%(93/119),阴性预测值均为100%(50/50),准确性分别为98.2%和84.6%。经比较,多重nPCR和多重RT-PCR的检测敏感度都高于NASBA法。在病毒载量<103copy/mL的患者,nPCR的检测敏感性高于RT-PCR,在病毒载量在(103～104)copy/mL的患者及病毒载量≥104copy/mL的患者,2者的敏感性比较相近,均接近100%;检测的10例可疑急性感染者中,有5例患者的nPCR和RT-PCR检测结果阳性,抗体在随访过程中阳转,证实为HIV急性感染者;检测的43例DNA样本分属于B’亚型(37例),AE亚型(5例)和BC亚型(1例)。结论本课题组建立的PCR检测方法可以对我国主要流行的B’、AE和BC亚型病毒株得到很好的扩增效果;nPCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较小,RT-PCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较大;PCR方法可以用于HIV急性感染者的早期诊断。

摘要：目的 建立结合多重反转录巢式PCR技术检测HIV RNA的小型集合NAT,用于MSM人群急性感染的筛查诊断.方法 利用2008年10月至2009年3月期间从3名HIV窗口期感染者、30名HIV慢性感染者、97名健康人采集冻存的EDTA抗凝血浆建立小型集合NAT.将10份待测标本混合组成1个集合,离心富集病毒,提取RNA 针对HXB2的nt5783-nt6228和nt1235-nt2012区分别设计2对引物 采用多重RT-PCR、巢式PCR扩增2个目标区的核酸片段,对结果阳性的集合中标本进一步分别检测.确定小型集合NAT的灵敏度,并进行验证.应用建立的方法对1 005份与上述标本同一时期收集的MSM人群的HIV抗体阴性血浆进行检测.结果 （1）成功扩增出目标区的2条特异性片段,灵敏度为162拷贝/ml （2）对3份HIV窗口期感染者标本用小型集合NAT方法盲法验证的结果和预期一致 （3）用多重RT-PCR和巢式PCR对30份HIV抗体阳性标本检测,阳性率100%（30/30） （4）发现1 005份血浆标本中有1份为HIV RNA阳性,追踪随访发现HIV-1抗体转阳.结论 本研究中建立多引物小型集合RT-PCR、巢式PCR结合的小型集合NAT的敏感性好,可用于MSM人群HIVG感染窗口期筛查检测.