摘要：本实验旨在研究氧化型低密度脂蛋白受体1(Oxidized Low-Density Lipoprotein Receptor 1,OLR1)基因在小鼠前脂肪细胞3T3-L1分化过程中的表达规律,阐明OLR1基因过表达载体的构建方法。收集3T3-L1细胞不同分化阶段的RNA,利用荧光定量PCR检测基因的表达量。根据GenBank中小鼠OLR1基因序列设计引物,PCR扩增基因CDS序列,连入pcDNA3.1载体,获得基因过表达载体,并对其分子生物学特征进行分析。结果表明:OLR1基因在小鼠3T3-L1细胞分化过程中表达量升高(P<0.01);测序和双酶切结果表明OLR1基因过表达载体构建成功;生物信息学分析表明小鼠OLR1基因编码区全长1092 bp,编码363个氨基酸,包含CLECT(C-type lectin-like)保守结构域。

摘要：本研究旨在探究猪胞质5'核苷酸酶1A基因(Cytosolic 5'-Nucleotidase1A,NT5C1A)启动子区序列的结构特性,确定其核心启动子区并分析其关键转录因子结合位点,为探究其表达调控机制提供理论依据。对NT5C1A互作蛋白进行预测,在线生物信息学分析软件预测猪NT5C1A基因核心启动子区,根据预测结果设计7对启动子缺失片段引物,以硒都黑猪血液基因组DNA为模板,通过PCR扩增和Sanger测序方法获得NT5C1A基因5'端7个启动子缺失片段并克隆至pGL3-Basic载体,以双荧光素酶报告基因检测试验对缺失片段进行荧光素酶活性检测,并通过转录因子在线预测软件预测核心启动子区潜在的转录因子。结果表明,NT5C1A基因核心启动子位于转录起始位点-290~+109bp的位置(ATG作为+1),该区域含有MYOD1、MYOG、MYF5和SP1等肌肉发育相关的转录因子结合位点。本试验为研究NT5C1A基因调控猪肌肉发育的分子机制提供了理论依据。

摘要：CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,规律成簇的间隔短回文重复)平台是出色的基因组编辑工具,其中新型核酸酶Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)既可编辑DNA,也可编辑RNA,这一新平台可实现DNA或RNA的摩尔灵敏度以及单碱基错配的特异性检测,同时拓展用于病毒与细菌的精细检测(甚至是寨卡与登革热的近亲病毒株)、癌症早期监测和遗传性疾病等治疗;其需要设计少,技术操作简单,具有广泛的应用潜力,是基因组编辑的又一项卓越成果。综述了Cas13a系统的最新进展。