摘要：目的　干扰素调节因子 (interferonregulatoryfactors ,IRF) 3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子 ,寻找IRF 3新的基因拼接异构体 ,研究其结构及功能。方法　抽提人类细胞RNA ,用IRF 3已发表序列设计引物 ,作cDNA末端快速放大 (RACE)及RT PCR ,生物信息学方法比较新序列 ,亚克隆IRF 3b至 pcDNA3.1 flag ,转染人胚胎肾上皮 2 93细胞 ,用抗flag抗体作Westernblot分析 ,用荧光素酶功能分析的方法观测IRF 3b对病毒诱导的干扰素 β启动子荧光素酶活性的影响。结果　发现了一种新的IRF 3拼接异构体IRF 3b ,IRF 3b用了紧接第七外显子前的 1 6个第六内含子的碱基 ,导致阅读框架移位 ,相应蛋白质的C端第 32 8～ 4 52位为不同于IRF 3的新C末端。Westernblot出现预期的相对分子质量 (Mr)为 57.75× 1 0 3的IRF 3b蛋白强阳性条带。新的外显子序列可在小鼠的表达序列标签 (EST)表达库中找到同源序列 ,提示这种新的异构体在生物演进中有其保守功能 ,IRF 3b荧光素酶功能分析显示 ,该同分异构体能抑制病毒诱导的干扰素 β启动子活性至对照组的 4 0 %～ 50 %。结论　新的异构体的发现为IRF 3这一重要分子的功能调节提供了新的线索 ,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂 ,提示其功能为干扰素产生的?

摘要：目的干扰素调节因子(IRF)3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子,寻找IRF-3新的剪接异构体,研究其结构及功能.方法抽提人类细胞RNA,用IRF-3已发表序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及逆转录聚合酶链反应,生物信息学方法比较新序列,亚克隆IRF-3c至pcDNA3.1-flag,转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,用萤虫素酶功能分析的方法观测IRF-3c对病毒诱导的干扰素β启动子萤虫素酶活性的影响.结果发现了一种新的IRF3剪接异构体IRF-3c,IRF-3c用了紧接第六外显子后的180个第六内含子的碱基,新引入的最初第2、3、4个新碱基为一终止密码子,导致IRF-3c蛋白多肽终止于第327位.Western blot出现预期的相对分子质量为44 000的IRF-3c的蛋白强阳性条带.新的引用外显子序列可在小鼠的ETS表达库中找到同源序列,提示这种新的剪接体在生物演进中有其保守功能,IRF-3c萤虫素酶功能分析显示,该剪接体能抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性至对照组的40%～50%.结论新的剪接体的发现为IRF-3这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它是病毒感染通路中干扰素的显负性抑制剂,提示其功能为干扰素产生的精细调节成分,可防止干扰素的过度产生,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义.

摘要：目的寻找钾-氯协同转运子(KCC)1新的同分异构体及分析其意义。方法抽提正常人肾组织RNA,用已发表KCCl序列设计引物,进行cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,以Northern印迹分析证实新的同分异构体的存在,并用生物信息学方法比较新序列。结果RACE和Northern印迹分析结果证实在人肾组织中有3种KCCl的新的同分异构体,与野生型KCCl不同的是,新的KCCl同分异构体2含部分内含子1的序列(外显子1b),作为其外显子1.蛋白翻译起始密码子也位于该外显子中。新的KCCl同分异构体3含外显子1b、外显子2、内含子2及以后与野生型KCCl相同的序列,蛋白翻译起始密码子位于外显子4,导致-长的5'端非翻译区,内含子2靠外显子3的位置有-翻译终止密码子。新的KCCl同分异构体4含部分内含子3作为其5'端非翻译区。结论新的异构体的发现为KCC家族增添了新的成员,并为KCCl这一重要分子的转录和功能调节提供了新的线索,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义。由于启动子类型的不同对同分异构体基因转录的选择起主动的调节作用,多个同分异构体及多个启动子的存在对理解KCCl复杂的生理功能、调节过程和致病机制具有重要意义。

摘要：目的研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞（hBMSC）中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）3酶活性的影响及其抗凋亡作用。方法原代培养hBMSC。谷氨酸诱导hBMSC凋亡。设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰（siRNA）序列（Par-4-SiRNA-1、2），构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染hBMSC，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western印迹测定Smac蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶的活性。结果设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默，Par-4 mRNA水平分别被降低88％、67％，谷氨酸诱导hBMSC凋亡，凋亡百分率为（58．9±8．9）％。Par-4-SiRNA-1可显著拈抗谷氨酸的诱导凋亡作用，凋亡百分率降为（37．2±6．3）％（F=58．26，P〈0．01）。Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上凋（P〈0．01）和Caspase-3酶活性上调（P〈0．01）有显著的抑制作用（P〈0．01）。结论Par-4基因沉默能拈抗谷氨酸对hBMSC凋亡的诱导作用。其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关。

摘要：目的探讨小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代培养人骨髓间充质干细胞，谷氨酸诱导凋亡。设计和合成针对Par-4基因mRNA的siRNA（Par-4-siRNA），构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染人骨髓间充质干细胞，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR（real-timePCR）法检测Par-4mRNA的表达量。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western blot测定磷酸化（Thr308）的蛋白激酶Aktl蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶活性。结果筛选出的Par4-SiRNA-1、2显著抑制人骨髓间充质干细胞中Par-4基因的mRNA表达，mRNA水平分别降低88％、67％。在谷氨酸诱导后24h，人骨髓间充质干细胞发生凋亡，百分率为60．30％±6．82％。Par-4-SiRNA-1、2都显著抑制谷氨酸的诱导作用，凋亡百分率降为38．80％±3．97％（P〈0．01）和45．49％±4．32％（P〈0．01）。谷氨酸诱导后24h人骨髓间充质干细胞中磷酸化Aktl蛋白表达下调（89．074-6．42和28．30±5．65，P〈0．叭），而Par-4-SiRNA-1、2对之下调都有显著抑制作用（63．564-6．75和45．59±4．88，均有P〈0．01）。谷氨酸诱导后24h人骨髓间充质干细胞中Caspase-3酶活性上调（0．1428±0．0495和0．8616±0．1051，P〈0．01），而Par-4-SiRNA-1、2对之上调都有显著抑制作用（0．6581±0．0555和0．7041±0．0401，均有P〈0．01）。结论小RNA干扰可靶向抑制Par-4基因的表达，拮抗谷氨酸诱导的人骨髓间充质干细胞的凋亡。

摘要：“不同方案泼尼松治疗儿童原发性肾病综合征的疗效及复发危险因素分析”这篇文章发表在本刊本期第853~857页。该文被评为本期优秀论文。本刊邀请了南京大学附属泰康仙林鼓楼医院吴升华教授为该文做了点评,供读者阅读参考。该论文作者前瞻性地设计了临床研究,即应用足量泼尼松4周与6周的治疗方法,观察对于初发原发性肾病综合征(最后观察的病例均为激素敏感型)患儿的疗效及其对缓解后复发的影响。在定期随访的1年内,观察到足量泼尼松治疗原发性激素敏感型肾病综合征的方案由4周延至6周,可减少患儿前3个月内的复发;起病年龄≥6岁及高水平尿蛋白量,是1年内复发的独立危险因素。