摘要：国家标准GB/T 26718-2011《城市轨道交通安全防范系统技术要求》的颁布实施,将对城市轨道交通安防行业的发展带来深远的影响,同时也对相关从事城市轨道交通安防集成项目的企业提出了更高的能力要求。从整体设计能力、工程技术能力、全面服务能力等方面,阐述了新国标对安防集成企业的能力要求。指出了城市轨道交通安防集成企业能力建设的重点为:提高参与标准制定的意识,提高技术及管理水平,提高全项目周期服务能力。

摘要：目的建立一种可靠的PCR方法,用于RHD血型基因型的研究。方法根据RHD血型基因的特点,设计针对不同RHD基因型的特异性引物,建立多重PCR方法,并与商用试剂盒进行对比。结果本研究所建立的用于鉴定RHD血型基因型的多重PCR方法,与商用试剂盒具有相同的试验结果。结论本研究建立的多重PCR方法具有简便、准确和经济的特点,可以用于RHD基因分型。

摘要：说课作为一种教学、教研改革的手段,是教师进行教学设计、表达自己的教学设想及其理论依据的重要途径。文章以中药学教材中发散风热药之桑叶和菊花为例,从教学内容、学情分析、教学资源、教学方法、教学过程、课后反思等方面进行教学设计,以期与同行交流,提升教学水平,确保实现“以学生为主体,以教师为主导”的教育理念。

摘要：目的建立单细胞巢式PCR检测技术,用以检测单个细胞的RHD。方法采用稀释法获得单个细胞,直接提取DNA,根据RHD特点设计两对特异性引物进行巢式PCR,凝胶电泳观察结果,将扩增产物测序以检测扩增的目的基因。结果通过巢式PCR,阳性对照可以获得明显的目的产物,阴性和空白对照无扩增产物,10份Rh阳性单细胞检测标本均能检出RHD。结论建立的检测RHD单细胞巢式PCR检测技术具有很好的特异性和敏感性,可应用于生殖医学等领域,为预防Rh新生儿溶血病提供新的技术途径。

摘要：目的构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响。方法根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接。转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定。293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度。将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1。用Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响。结果构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P<O.05)。CCK-8法细胞增殖试验结果显示,较空白组和阴性病毒组,let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P<O.05)。结论成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞,获得稳定过表达let-7a的TYST-1;并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖。

摘要：目的利用基因定点突变技术构建RHD变异型克隆,克服RHD变异型克隆难以获得的问题。方法提取总RNA并反转录后,扩增获得RHD和RHCE混合c DNA,从克隆质粒中筛选RHD;根据弱D12、弱D25和弱D33的特异性突变位点设计引物,分别进行PCR扩增反应,诱导目的基因突变,Dpn I酶处理PCR产物,转化后测序验证。结果克隆测序的结果显示,质粒中分别存在830A、341A和520A的突变,证实已经通过基因定点突变技术成功获得了弱D12、弱D25和弱D33的克隆。结论通过基因定点突变可以改造野生型RHD-c DNA,获得变异型的RHDc DNA,为血型研究打开新的路径。

摘要：目的建立Mur基因分型的方法,同时检测西安地区无偿献血人群中Mur血型的基因频率。方法根据Mur基因序列特异性设计引物,建立了Mur血型的基因检测方法。同时对379例西安地区无偿献血者进行GYP（BA-B）Mur基因检测,检出的阳性样本用抗-Mur进行确认,并随机抽取20例基因检测阴性的样本,用抗-Mur检测作为对照。结果建立的Mur基因检测方法的检测结果与血清学检测结果吻合,证明该方法具有很好的特异性。西安市无偿献血者样本379例,检出Mur阳性4例,Mur抗原在西安地区无偿献血人群中的频率为1.05%。结论建立的Mur基因分型方法可以替代血清学的方法用于鉴定Mur血型抗原,对于了解人群分布频率,筛查和提供相合的血液,保障临床输血安全具有重要的作用。

摘要：目的建立简易的RHCE基因编码区全长测序方法。方法依据RHCE基因序列的特异性,设计10对特异性引物分别扩增RHCE基因的10个外显子,同时再设计10条测序引物用于测序。将该方法用于检测3例Rh阳性标本、1例Rh阴性标本、1例D--表型标本及1例弱E表型标本。结果 10对特异性引物在统一的PCR条件下成功扩增出RHCE基因的10个外显子,3例Rh阳性标本及1例Rh阴性标本的测序序列与RHCE基因标准序列一致;D--标本PCR扩增和测序结果显示缺失第3、4和第5外显子,提示该个体携带一种新的由RHCE/RHD基因交换形成的等位基因RHCE-D(3-5)-CE;弱E标本测序结果发现在第5外显子存在一处碱基突变(762G>C),其他外显子测序结果未发现变异。结论 RHCE基因编码区全长测序方法可用于一般实验室进行RHCE基因测序。

摘要：目的对送检的1例抗体筛查阳性血样进行抗体鉴定,探讨复合抗体的鉴定思路并提供输血方案。方法采用血清学试验方法进行血型鉴定、抗体筛查;使用基因检测方法进行Diego血型基因分型;设计吸收放散试验进行复合抗体的鉴定。结果血清学试验结果显示患者血型结果为B,ccDEE,Jk(a-b+),Le(a-b+),Fy(a+b-),Di(a+b-);基因分型结果显示患者Diego基因型为Di(a+b-);结合上述结果设计吸收放散试验,检出患者血清中存在IgG抗-Di^(b)、IgG抗-Ce、IgG抗-Jk^(a);通过配合使用免疫球蛋白,并采取针对性的输血措施,为患者的成功救治提供了血液保障。结论对于抗高频抗原抗体联合多种抗体的鉴定,应将多种试验技术和方法组合应用,灵活设计试验方案。保障输血安全的措施不应仅局限于提供相合性的血液,更需联合多种措施保障输血安全。

摘要：目的:探讨神经生长因子(NGF)改善糖尿病大鼠随意皮瓣缺血坏死的分子机制。方法:①建立Wistar大鼠I型糖尿病模型,将这些大鼠随机分为模型组(DM组)和实验组(DM+NGF组)两组,设计9 cm×3 cm的改良McFarlane皮瓣并进行皮瓣移植,观察两组皮瓣的存活情况并统计存活面积。采集大鼠皮瓣组织,利用HE染色和免疫组化染色研究皮瓣存活与血管生成的关系,通过Western blot实验研究两组CD31、VEGF血管指标蛋白表达差异以及AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路的变化。②利用建立的高糖人脐静脉内皮细胞(HUVEC)模型,将细胞实验分为细胞模型组(DM组)和细胞实验组(DM+NGF)组两组,通过CCK-8增殖实验、MCM2+细胞免疫荧光实验、细胞划痕实验、Transwell实验和血管成管实验,分析在高糖环境下NGF对HUVEC细胞的增殖、迁移和血管形成的影响。利用STRING数据库探讨NGF对VEGF、SDF1α、HIF-1α、PDGFA、TGF-β1等常见血管生成相关因子的互作情况以及功能富极化分析;通过RT-qPCR和Western blot验证NGF对其表达的影响。通过RNA-seq测序和Western blot分析NGF对HUVEC的影响机制。结果:动物实验方面:DM+NGF组比DM组皮瓣存活面积多(P<0.01);CD31免疫组化染色发现DM+NGF组CD31阳性微血管密度比DM组高(P<0.01),且DM+NGF组CD31和VEGF表达均较DM组高(P<0.05);而皮瓣组织AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路的RAGE下降(P<0.05),而p-ERK1/2上调(P<0.05)。细胞实验方面:成功建立了25 mmol/L高糖模型,100 ng/mL NGF能促进HUVEC的增殖(P<0.01);与DM组比,DM+NGF组的细胞迁移和细胞血管生成能力明显加强(P<0.01),且DM+NGF组的VEGF、PDGFA、HIF-1α、Arg-1和bFGF相对表达量更高(P<0.05),而KEGG和GO功能富集化富集结果主要与血管形成和AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路途径等相关。结论:NGF可能通过影响AGE-RAGE/MAPK-ERK1/2信号通路促进糖尿病大鼠内皮细胞血管生成,从而改善随意皮瓣的缺血坏死。