摘要：以八眉猪为试验材料,提取其内脏脂肪、皮下脂肪、肌肉、肾脏、肝脏、心脏、肺脏和脾脏总RNA和总蛋白质,设计合成PPAR-γ1和PPAR-γ2基因的引物,以猪β-actin基因为内参,用半定量(Semi-Quantitative,SQ)RT-PCR检测PPAR-γ1和PPAR-γ2 mRNA在以上各组织中的表达;用免疫印迹技术(Western Blot)检测以上各组织中PPAR-γ1和PPAR-γ2蛋白的表达。结果显示,PPAR-γ1 mRNA及蛋白在以上各组织均表达,在内脏脂肪和皮下脂肪组织中表达水平显著高于其他组织,在肺脏中表达水平最低;PPAR-γ2 mRNA和蛋白质高表达于内脏脂肪、皮下脂肪、脾脏和心脏,而在肺脏、肾脏、肝脏、肌肉中表达水平很低。结果提示,PPAR-γ在不同组织的表达差异,可能与其在不同组织中的功能有关。

摘要：取4月龄八眉猪和大白猪背部皮下脂肪组织,提取总RNA,根据大鼠细胞因子信号转导抑制因子-3基因(Suppressor Of Cytokine Signaling-3,SOCS-3)设计并合成引物,以猪-βactin基因作为内参,优化反应条件和体系,半定量(Semi Quantitative,SQ)RT-PCR单管扩增猪SOCS-3基因,经琼脂糖凝胶电泳分离后,Dolphin-DOC凝胶图像分析软件分析,测定各条带的光密度值,检测八眉猪和大白猪脂肪组织中SOCS-3基因mRNA的表达差异。结果表明:八眉猪脂肪组织SOCS-3 mRNA的表达丰度极显著高于大白猪(P<0.01)。这种差异可能是2种经济类型猪脂肪沉积能力不同的主要原因之一。

摘要：根据大鼠细胞因子信号转导抑制因子(suppressorofcytokinesignaling,SOCS)-3设计并合成一对引物,从八眉猪皮下脂肪组织提取总mRNA,RT-PCR扩增获得猪SOCS-3cDNA;利用半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR技术检测大白猪各组织中SOCS-3mRNA的表达量.扩增获得SOCS-3基因GenBank登陆号DQ644577,用CDD软件进行SOCS-3基因结构分析,该序列具有SOCS-3特有的保守结构域SH2和SOCS-box.用ClustalW软件进行同源性分析发现,猪SOCS-3基因与人、大鼠和小鼠的同源性分别为92%、88%和88%.SQRT-PCR组织表达检测表明SOCS-3基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、皮下脂肪和内脏脂肪中均有表达,其中肺脏和脾脏的表达丰度最高,肝脏和内脏脂肪中的表达量最低.

摘要：构建细胞信号抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)慢病毒干扰载体,获得有感染性的病毒颗粒,感染猪前体脂肪细胞和成肌细胞,并检测其对前体脂肪细胞的干扰效率.首先设计并合成3对针对目的基因SOCS3的siRNA序列,退火后连接于LentiH1上,测序验证后,与包装质粒△8.9和vsv-g共转染到293T细胞中进行包装和浓缩,纯化后测定病毒滴度,然后感染猪前体脂肪细胞和成肌细胞.重组慢病毒载体LentiH1-siRNA经酶切和测序鉴定正确,病毒滴度为3×107tu/mL,感染猪成肌细胞和前体脂肪细胞后,可见报告基因GFP的表达;RT-PCR和Western印迹分析表明,前体脂肪细胞中SOCS3的表达被显著下调,其中LentiH1-siRNA3介导对SOCS3基因mRNA和蛋白的干扰效率分别达53%和71%.本研究成功构建了猪SOCS3慢病毒干扰载体,感染猪前体脂肪细胞能稳定沉默SOCS3基因的表达,为深入研究SOCS3的功能奠定了基础.