摘要：背景:转录因子FOXP3是调节性T细胞的特异性标志,对于造血干细胞移植后移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达水平的关系目前仍存在争议。目的:观察异基因造血干细胞移植后患者外周血FOXP3mRNA的表达,初步探讨利用FOXP3mRNA表达水平的变化进行临床早期诊断移植物抗宿主病的可能性。设计:回顾性病例分析。对象:选取2001-03/2007-06在广东省人民医院血液科行异基因造血干细胞移植的白血病患者31例,男18例,女13例,平均年龄32岁。方法:所有患者均采用改良BU/CY联合FLU方案进行预处理,经深静脉输入单个核细胞数5.48(3.7～8.4)×108/kg,CD34+细胞数10.45(3.6～28.0)×106/kg。移植后出现移植物抗宿主病的患者在治疗前、治疗好转或缓解时留取外周血标本,尚无移植物抗宿主病的患者复查时采集外周血标本。主要观察指标:采用实时定量PCR技术监测外周血样本FOXP3mRNA表达及其与患者移植物抗宿主病的发生情况。结果:31例患者行异基因造血干细胞移植后,9例未出现移植物抗宿主病,9例发生急性移植物抗宿主病,13例出现慢性移植物抗宿主病。FOXP3表达水平的变化与急性移植物抗宿主病的临床演变相关,急性移植物抗宿主病发生时FOXP3水平较临床无移植物抗宿主病时明显降低(P=0.009),好转后FOXP3水平又逐步升高或恢复到基础水平;慢性移植物抗宿主病患者FOXP3的表达水平与无移植物抗宿主病患者相比无明显差异(P=0.107)。结论:急性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达降低有关,动态检测FOXP3mRNA表达水平的变化有可能为临床早期诊断急性移植物抗宿主病或预测其发生提供参考。实验数据未发现慢性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达有关。

摘要：探讨MHC II类转录激活因子(CIITA)的M1-RNA对细胞表面MHC II类分子表达的抑制。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CIITA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CIITA靶基因,分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-629-GS亚克隆入psNAV载体(psNAV-M1-629-GS,pA629)并稳定转染HeLa细胞株,流式细胞术检测经典的MHC II类抗原(HLA-DR、-DP、-DQ)的表达,RT-PCR检测CIITA的mRNA水平。在重组人γ干扰素诱导下,pA629阳性HeLa细胞株表面HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了83.03%及89.91%;同时CIITA的mRNA含量明显减少(P<0.05)。CIITA的M1-RNA抑制了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHC II类分子的表达,为移植物抗宿主病的研究提供了一种新方法。

摘要：目的探讨主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的siRNA对软骨细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的抑制。方法设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siR-NA2、siRNA3)。通过纳米载体介导siRNA稳定转染原代软骨细胞,流式细胞术检测经典的MHC-Ⅱ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及其调控的MHC-Ⅱ类分子的mRNA水平。结果在重组人干扰素(interferon,IFN)-γ诱导下,siRNA3阳性软骨细胞表面HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了93.36%、94.16%,同时CⅡTA的mRNA含量明显减少。结论siRNA3抑制了CⅡTA的mRNA含量,并阻止其调控的MHC-Ⅱ类分子的表达。