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Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备: 收藏
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引用; 《贵州医科大学学报》2019年第7期44卷 757-761,766页; 作者：刘芳卢婷蔡梦迪吴芳草陈相好王彩霞崔古贞陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004; 目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化***21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术...; 目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化***21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术分离纯化Cas9蛋白;将纯化获得的Cas9蛋白免疫新西兰大白兔,制备Cas9蛋白多克隆抗体。结果:pET28a-Cas9重组表达载体转化的***21(DE3)可表达Cas9蛋白,纯化的Cas9蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体效价>1∶256 K。结论:本研究获得了高质量Cas9蛋白及多克隆抗体,为后续CRISPR-Cas9基因编辑的应用奠定了良好的基础。; 来源：详细信息评论

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