摘要：毕业设计是大学教育过程中重要的实践教学环节。通过带教与分枝杆菌感染免疫相关的微生物学毕业设计,针对如何充分发挥学生主动性,从课题设计、实践操作、论文写作等多方面进行了心得探讨,以期提高学生的科研创新能力,激发科研兴趣,培养创新型科研人才。

摘要：结核病(TB)发病具有种族易感性的分布特点,揭示结核病种族易感性的发病机制对明确结核病的高危人群、制定相应的防控策略具有重要作用。本研究从宿主易感相关基因转录水平出发,探讨ASAP1、NRAMP1和SP110表达水平与蒙古族和汉族结核病发病的关联程度。基于病例-对照研究设计,收集蒙古族和汉族96例结核病患者和126例健康人群静脉血,采用实时荧光定量PCR的方法检测易感性关联基因ASAP1、NRAMP1和SP110的mRNA表达水平,并分析不同民族间、结核患者与健康对照组间基因表达水平的差异。蒙古族结核患者结核易感基因ASAP1、NRAMP1 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05),汉族结核病患者NRAMP1表达水平高于对照组(P<0.05)。蒙古族女性结核病患者,SP110的表达显著性差异(P<0.05)。汉族ASAP1、SP110 mRNA表达在结核病患者与对照之间没有显著差异。蒙汉民族结核病发病易感性与宿主基因ASAP1、NRAMP1和SP110表达有关,尤其是女性人群。提示结核病防治过程中可参考这些易感基因的表达评估结核病高危人群。

摘要：目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。

摘要：为优化环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）法检测牛奶中结核分枝杆菌的条件,以结核分枝杆菌高度保守的16SrRNA基因为靶基因设计3对特异性引物（F3-B3、FIP-BIP、FLP-BLP）进行试验。比较改良后的CATB/NaCl法、细菌基因组DNA提取试剂盒及热裂解法提取其DNA的效率,确定最佳的提取方法。用灭菌处理过的牛奶对结核分枝杆菌悬液进行倍比稀释以确定该检测方法的敏感度。以牛奶中常见的布鲁氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、巴氏杆菌、沙门氏菌为对照,对该方法进行特异性测试。结果表明,改良后的CTAB/NaCl法对牛奶中结核分枝杆菌DNA的提取效果要优于其他两种方法。LAMP法检测结核分枝杆菌的灵敏度为3×10^0CFU/mL,对人工阳性乳中结核分枝杆菌检测的灵敏度为3×10^1 CFU/mL。

摘要：目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。

摘要：目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。

摘要：结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的传染病。抗结核病疫苗设计的关键在于使机体获得长期保护以抵御MTB的再次感染。CD4^(+)记忆T细胞在适应性免疫反应中发挥重要作用,不仅参与细胞免疫应答,而且参与体液免疫的调节。然而,在MTB慢性感染的过程中,CD4^(+)记忆T细胞数量及功能均受损。本研究主要综述了CD4^(+)记忆T细胞的分类及各类记忆细胞的功能,并介绍它们之间的协同作用;此外,着重综述了近几年关于CD4^(+)记忆T细胞抗MTB感染作用及功能异常机制的研究进展,为抗MTB药物及疫苗的研发和效果评价提供参考。

摘要：当代著名物理学家李政道说得好：“培养人才最重要的是培养创造能力.”同时,培养学生的创新意识和创造能力是语文教学中实施素质教育的重要目标和一项基本任务.培养能够适应新世纪的具有创新能力的新型人才,是教育工作者,特别是小学语文教师义不容辞的责任.