摘要：根据Gen Bank中绵羊促卵泡激素受体基因(FSHR)的mRNA序列(登录号:NM_001009289.1)设计引物,反转录PCR(RT-PCR)扩增蛋白编码区(CDs)区,以获取绵羊FSHR基因可变剪接体,并通过Western blot验证其在组织中的表达,通过免疫组织化学方法检测其在卵泡中的表达位置。结果表明,在绵羊卵巢中除了全长的、编码695个氨基酸的FSHR表达产物外,还鉴定到分别编码694个、633个、595个、582个和533个氨基酸的FSHR可变剪接形式的转录产物。在卵泡中主要以695(694)、633和595 3种转录本形式存在。但在颗粒细胞中绵羊促卵泡激素受体主要以经典分子即695个氨基酸的形式存在。在卵泡发育过程中,FSHR蛋白质含量发生变化:在初级卵泡中,FSHR主要在卵母细胞中表达,而不是在单层的颗粒细胞中表达,在次级卵泡中,FSHR在颗粒细胞和卵母细胞中均不表达,到三级卵泡(有腔卵泡)时,FSHR蛋白质在颗粒细胞中表达丰富。可见,绵羊FSHR基因虽然存在可变剪接体的结构,但其功能主要取决于经典型的695个氨基酸蛋白质分子,并且对初级卵泡的发育具有一定的作用。

摘要：　本实验以BOV97M序列和牛的1.715卫星DNA序列设计引物进行PCR扩增,其中前者为雄性特异扩增,后者为雌雄共同扩增,以进行牛的性别鉴定。PCR扩增共进行43个循环,其中前11个循环为雄性特异扩增,在随后的33个循环中,再加入内标引物,即进行多重PCR扩增,其灵敏度可达到10pg级(约3个细胞)。

摘要：应用ELISA和PCR方法对小麦腥黑穗病菌进行检测研究。利用HRP酶标记的第二抗体(羊抗兔抗体)与结合抗原的兔抗小麦矮腥抗体相结合,通过显色反应来区别正常小麦与染病小麦。根据Genbank的DNA的序列设计了特异性引物,通过PCR方法区分小麦矮腥黑穗病、光腥黑穗病和网腥黑穗病。

摘要：本文以染色体牙釉蛋白基因(AML)对牛肌肉基因组进行性别鉴定,为应用此基因进行胚胎鉴定提供理论依据。本研究应用奶牛染色体牙釉蛋白基因的DNA序列,设计了牛染色体特异性引物P1和P2,并通过聚合酶链反应(PCR)扩增牛肌肉组织中的X和Y染色体上的牙釉蛋白基因内第五内含子。最后依据其分子量的差异对电泳后的性染色体所呈现的不同区带进行区分,从而达到性别鉴定的目的,具有很高的应用价值。

摘要：旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析。以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分析。根据预测的编码区氨基末端260氨基酸对应的序列设计表达引物,构建原核表达载体pET15b-oamh260,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。序列分析结果表明,获得的绵羊AMH基因序列全长1 797 bp(GenBank登录号:KC986978),完整开放阅读框为1 728 bp,共编码575个氨基酸,氨基末端24个氨基酸为信号肽序列,羧基末端区域TGFβ家族保守区,全序列与牛AMH的同源性为95.80%。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达的融合蛋白大小为30 000,与预期蛋白质大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白质为His融合蛋白。以上结果表明该试验成功克隆了绵羊AMH基因的完整编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

摘要：【目的】比较绵羊卵母细胞体外受精后卵裂快慢对胚胎发育潜能及移植怀孕率的影响。【方法】使用因卵巢粘连无法作为超排供体的成年杜泊母羊,常规激素诱导卵泡超数发育,手术或屠宰回收卵丘—卵母细胞复合体(COCs),进行体外成熟(IVM),体外受精(IVF)和体外培养(IVC)。分别统计受精24、36、48 h卵裂情况及第7天的囊胚率,并按实验设计进行移植,统计怀孕率。其中,受精24 h及之前卵裂的记为卵裂快组,受精24 h之后卵裂的胚胎记为卵裂慢组。【结果】(1)卵裂快组胚胎占总胚胎数比例达77.85%,极显著高于卵裂慢组的22.15%(P0.05);(4)卵裂慢组的早期胚胎移植两枚的怀孕率极显著高于移植单枚的结果(33.89%vs 11.67%,P0.05);(6)受精后24 h或48 h移植,对怀孕率没有影响;(7)从形态上无法判断早期胚胎的质量。【结论】绵羊体外早期胚胎,卵裂快组单枚移植,卵裂慢组双枚移植,囊胚单枚移植,能提高胚胎利用率。