摘要：目的利用AdMax腺病毒系统构建人VEGF-C-siRNA腺病毒载体并在293细胞中扩增制备重组病毒。方法选择针对人VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,将其克隆入pDC316-EG-FP-U6载体中构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达。结果经限制性内切酶、PCR检测和GFP表达证实成功地构建了携带VEGF-C-siRNA的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论成功地构建了携带VEGF-C-siRNA片段的重组腺病毒载体,为进一步抗肿瘤淋巴管生成的研究奠定了基础。

摘要：目的构建Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP腺病毒载体,观察腺病毒介导的VEGF-CsiRNA对人结肠腺癌LOVO细胞血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影响。方法设计并合成VEGF-CmRNAsiRNA,构建穿梭质粒pDC316-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6,与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6。转染人结肠腺癌LOVO细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot法分别从mRNA和蛋白质水平检测其对VEGF-C表达的抑制效果。结果成功构建重组腺病毒Ad5F35-VEGF-CsiRNA-EGFP-U6,纯化后获得7.9×109IU/ml滴度的病毒。转染LOVO细胞48h后,VEGF-CmRNA表达下降为对照组的(30.7±1.2)%(P<0.05);VEGF-C蛋白的表达也明显受到抑制,转染72h后下降为对照组的(47.8±2.2)%(P<0.05)。结论腺病毒介导的VEGF-CRNA干扰可显著抑制人结肠腺癌细胞的VEGF-C表达。