摘要：目的建立Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液特异性鉴别试验的RT-PCR法,并对该方法进行验证。方法根据GIAIDS数据库中新型冠状病毒Omicron株及其他突变株和原型株的S基因序列差异设计并合成引物OSTF1、OS1R,提取Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液病毒RNA,逆转录为cDNA,利用对Omicron株S蛋白基因序列中的特异性插入及缺失核苷酸序列设计的引物对进行PCR扩增,扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。对建立的RT-PCR法进行重复性、中间精密度、专属性、耐用性及灵敏度验证,并用该方法鉴别6批Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗原液。结果Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液利用引物OSTF1/OS1R进行RT-PCR检测,可扩增出约460 bp的条带,而原型株、Beta株、Delta株新型冠状病毒灭活疫苗原液(Vero细胞)均无法扩增出条带;重复3次检测、2名实验人员分别在3 d重复3次检测、利用3种不同退火温度进行RT-PCR,Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液均可扩增出约460 bp的条带;原液蛋白浓度在0.04μg/mL以上、RNA浓度在0.128 ng/μL以上均可扩增出较亮的约460 bp的条带;6批Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液经RT-PCR检测,均可见约460 bp的条带。结论RT-PCR法专属性、重复性、中间精密度、耐用性和灵敏度均良好,可用于Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液鉴别。

摘要：目的建立特异性鉴别新型冠状病毒Beta株灭活疫苗原液的逆转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)并验证。方法在新型冠状病毒Beta株刺突蛋白(spike, S)受体结合域(receptor binding domain, RBD)中3个特异性突变位点的上下游保守区域设计引物S3F/S3R, 通过RT-PCR扩增843 bp目的DNA。对扩增产物进行测序, 与原型株的S基因序列进行对比, 通过3个特征突变识别Beta株。对该方法的重复性、专属性、耐用性和灵敏度进行验证。结果该方法能准确扩增出843 bp目的DNA, 经测序表明, 扩增产物与新型冠状病毒Beta株基因序列一致, 包含3个特征突变位点。取1批Beta株原液进行6次PCR, 测序结果显示与Beta株核苷酸序列一致。S3F/S3R引物只对S的RBD区域有扩增作用。Beta株原液4 ℃和-70 ℃放置8周, 仍然可以扩增出目的条带, 且测序结果正确。将原液提取RNA稀释成不同浓度后进行RT-PCR, 得出最低检测限为0.032 ng/μl。结论建立的RT-PCR具有良好的专属性、重复性、耐用性和灵敏度, 能成功区分新型冠状病毒原型株与Beta株, 可用于新型冠状病毒疫苗生产中原液的鉴别。