摘要：目的探讨HBsAg阳性肝细胞肝癌（HCC）细胞基因组中HBVX基因（HBx）所参与整合的位点。方法取6例HBsAg阳性HCC患者癌组织，提取基因组DNA；行酶切、连接操作，针对HBx设计引物，行反向PCR扩增；将产物电泳后切胶回收特异性电泳条带，从中回收DNA并克隆至pMD18-T载体，转化、培养后取菌液行基因测序；用Blast工具进行序列比对。结果反向PCR扩增后，电泳检测可见7条特异性条带；克隆后得到测序结果22个；经序列比对发现3个整合位点，分别定位于19q12、2q32．2、22q12，其中，定位于19q12的基因为CCNE1。结论在HBsAg阳性HCC细胞基因组中存在HBx的整合；19q12、2q32．2、22q12是HBx参与整合的位点，提示HBV整合的CCNE1基因参与了HBsAg阳性HCC的发生和发展。

摘要：为了解广东地区庚型肝炎病毒（HGV）流行情况，为广东地区庚型肝炎的防治提供客观资料。以DNASIS软件对Genbank收录的3株HGV全序列：U44402、U45966和U36380进行同源性比较，取高度保守的5'非翻译区（5'UTR）设计合成两对套式引物，建立检测HGVRNA的逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，并对其中一输血后非甲-戊型肝炎血清PCR产物进行分子克隆与核苷酸序列分析以鉴定其特异性。结果表明，431例肝炎患者，185例静脉吸毒者及106例献血员HGVRNA阳性率分别为10．7％（46／431）、33．5%（62/185）和8．5％（9/106）。提示上述三种易感人群存在不同程度HGV感染。

摘要：目的 比较反向PCR（Inverse-PCR,IPCR）、Alu-PCR、接头PCR（Cassette-ligationmediated-PCR,CLM-PCR）三种PCR（Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应）方法在乙型肝炎病毒基因组（HBV DNA）整合位点筛选中的应用效果.方法 手术获取1例乙肝表面抗原（HBsAg）阳性的肝癌患者的肝癌组织,提取基因组DNA,设计相应引物,分别采用三种PCR方法进行扩增,将PCR产物回收,克隆至PMD18-T载体进行基因测序,利用BLAST工具进行序列比对,分析三种方法在乙型肝炎病毒（HBV）DNA整合位点确定中的效果.结果 采用Inverse PCR方法检测PCR产物后得到7个特异性电泳条带,克隆后得到测序结果22个,经序列比对发现3个整合位点;采用Alu-PCR方法,产物电泳得到13个特异性条带,得到测序结果32个,序列比对未发现整合位点;采用CLM-PCR方法,得到12个特异性电泳条带,得到测序结果4个,未发现整合位点.结论 在查找HBV整合位点的研究中,IPCR方法具有较稳定的扩增能力及较高的位点检测率.

摘要：目的 筛选安全有效新型EV71候选疫苗,为将来EV71疫苗开发应用奠定基础.方法 以重组蛋白VP1为疫苗设计靶点,不同候选疫苗包括灭活疫苗、DNA疫苗、VP1蛋白疫苗在0、2周、4周分别按照不同剂量和肌内注射途径免疫BALB/c雌性小鼠,在0、2周、4周、6周、8周、10周、16周分别采集小鼠尾静脉血,16周处死小鼠,收集小鼠脾脏细胞,检测小鼠体液免疫和细胞免疫功能,筛选评价候选疫苗的疗效和安全性.结果 灭活病毒疫苗、VP1 DNA质粒疫苗、VP1蛋白疫苗免疫小鼠2周后IgG抗体滴度即开始升高,4周后明显升高,8周后达高峰,至少维持16周以上;IgG亚类以IgG2a和IgG1为主.三种疫苗能诱导以γ-IFN和IL-4为主的细胞免疫反应.灭活疫苗疗效优于其他候选疫苗,未发现疫苗相关不良反应.结论 灭活病毒疫苗、VP1 DNA质粒疫苗、VP1蛋白疫苗均能诱导持久的特异性细胞免疫和中和抗体反应,以灭活病毒疫苗疗效较好,需要将来攻毒实验可进一步验证其免疫力.

摘要：目的分析ＴＴＶ（Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｅｄｖｉｒｕｓ）深圳分离株ＯＲＦ１部分基因序列。方法在ＴＴＶＯＲＦ１设计引物，建立巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），检测４０例广东地区非甲－庚型肝炎患者血清中ＴＴＶＤＮＡ。对ＰＣＲ产物进行分子克隆，以荧光法（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，３７３Ａ）测序。结果４０例非甲－庚型肝炎中２１例ＴＴＶＤＮＡ阳性（５２．５％）。对其中一株ＴＴＶ（ＳＺ１）ＯＲＦ１部分基因克隆、测序，并与Ｏｋａｍｏｔｏ等报道的２株（Ｎ２２、Ｇ１ａ）相比较，其核苷酸序列的同源性分别为９６．７％与９７．４％。结论本研究证实我国华南地区存在ＴＴＶ感染。

摘要：目的了解深圳地区不同人群ＴＴＶ的感染情况。方法在ＴＴＶＯＲＦ１保守区设计两对套式引物，建立了检测ＴＴＶＤＮＡ的巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），用该法对深圳地区９０例一般人群、８８例职业献血员、７９例静脉毒瘾者及２９例非甲庚型肝炎病人进行ＴＴＶＤＮＡ的检测。结果ＴＴＶＤＮＡ在以上４种人群中的阳性率分别为７８％，９０％，４１７％与４４８％，前者与后两者比较差异均有显著性（Ｐ＜００５）。９０例一般人群与８８例职业献血员中，１４例ＴＴＶＤＮＡ阳性者丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）均正常。结论深圳地区一般人群与职业献血员中ＴＴＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＴＴＶ感染的高危人群；

摘要：目的调查志愿无偿献血人群中输血传播病毒(TTV)的感染情况和分析TTVDNA部分基因序列。方法以TTVORF1保守区设计两对引物,用巢式多聚酶链式反应(PCR)检测TTVDNA,并克隆和测序。结果在血液筛查合格的无偿献血人群中检出TTVDNA的阳性率为5.0%(5/100)。在单一转氨酶异常,HBV、HCV和HIV血清标记物正常的献血人群检出TTVDNA的阳性率为5.6%(4/71)。两者有非常显著性差异(P<0.01)。与日本首例TTV-N22株相比,SZT1和SZT2株基因序列同源性为98.9%(3/272)和96.7%(9/272),SZT3和SZT4株为67.3%(89/272)和86.0%(38/272)。结论在符合献血条件的人群中存在无症状TTV携带者。与之相比较,在ALT异常献血人群中TTV流行率相对较高,对其部分基因序列的比较显示了较大的变异性。

摘要：目的分析深圳地区不同人群中 TTV(transfusion transmitted virus,TTV)感染情况及其基因型。方法在 TTV ORF1 设计引物,建立巢式聚合酶链反应,检测深圳地区不同人群血清中 TTV DNA。对 PCR 产物进行分子克隆,以荧光法(Applied Biosystems,373A)测序。结果 90例一般人群、88例有偿献血员、79例静脉毒瘾者、52例非甲～非庚型肝炎、67例乙型肝炎及72例丙型肝炎患者中,TTV DNA 阳性率分别为7.8%、9.0%、41.8%、48.0%、22.3%与27.8%。5株深圳 TTV(SZ1～SZ5)ORF1部分基因核苷酸序列同源性为66.2%～96.7%。基因分型5株中2株属Gl型(Gla亚型),3株属 G2型,其中2株为 G2b 型。结论深圳地区一般人群与职业献血员中 TTV 健康携带者较常见:静脉毒瘾者与非甲～非庚型肝炎患者是 TTV 感染的高危人群;乙型及丙型肝炎常重叠 TTV 感染;不同 TTV 分离株 ORF1部分基因序列变异可达33%,基因分型以 G1a 与 G2b 为主。

摘要：我们对80例非甲～非庚型肝炎患者、血清ALT升高以及长期维持性血透患者(部分患者有输血史)进行检测，对二十余例 TTV分离株进行测序研究，结果如下：　　提取患者血清DNA，巢式PCR扩增TTV。参照Okamoto等报道的N22分离株 TTV基因序列设计套式引物:n 5＇-ACA GAC AGA GGA GAA GGC AAC- 3＇(1892 ～ 1913),T2 5＇ - GGA TAC CTA TTAGCT C TC AT- 3＇(2187 - 2207), T3 5＇ -GGC AAC ATG TTA TGG ATA GAC- 3＇(1914- 1935) ,T4 5＇ - CCT C GC ATT TTACCA T TT CCA - 3＇(2165 - 2186)。

摘要：目的:分析我国华南地区庚型肝炎病毒(HGV)5′端非翻译区(5′UTR)基因序列及非甲一戊型肝炎病人中 HGV感染情况。方法:在 HGV 5′UTR 设计引物,采用逆转录一套式聚合酶链反应(RT-PCR)检测 HGV RNA,对扩增产物进行分子克隆,以荧光法(Applied Biosystems)测序。结果:63例非甲—戊型肝炎病人中6例 HGV RNA 阳性(9.5%)。对其中一株输血后 HGV(CE-S)5′UTR 核苷酸序列分析与 Linnen 等报道的2株(PNF2161,R10291)和 Leary 等报道的GBV-C 相比较,其核苷酸序列的同源性分别为89.2%,88.7%与87.1%。结论:本研究证实我国华南地区存在 HGV 感染。HGV 高度保守区5′UTR 的分子克隆与核昔酸序列的测定对开展 HGV 感染的基因诊断、流行病学调查等均具有重要意义。