摘要：目的对猪囊尾蚴排泄分泌抗原中差异表达蛋白富含亮氨酸重复序列结构域15(leucine-rich repeat containing15,LRRC15)进行真核表达,并预测其抗原表位。方法通过在线软件ExPASy-Port Param和Protean软件预测LRRC15蛋白分子质量、稳定性、氨基酸序列组成及等电点和T淋巴细胞抗原表位。采用基于PCR的精确合成(PCR-based accuratesynthesis,PAS)技术设计全长拼接引物,合成LRRC15基因。构建重组质粒pcDNA3.4-LRRC15并转染至人胚胎肾细胞HEK293,表达LRRC15蛋白,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blotting)鉴定。结果成功构建了重组质粒pcDNA3.4-LRRC15,表达分子质量约70 kDa的LRRC15目的蛋白。经ExPASy-Port Param软件预测,LRRC15属于亲水性蛋白,由644个氨基酸组成,分子质量为69.89 kDa,等电点为5.6;蛋白分子式为C_(3073)H_(4942)N_(846)O_(953)S_(28),不稳定系数为50.3,为一种不稳定蛋白。采用Protean软件预测发现,LRRC15蛋白位于292~295、353~361、521~526、555~564位氨基酸区段具有T细胞抗原表位优势,具有亲水性高、柔韧性好、表面可及性大、抗原性指数高的表位位于122~131、216~233、249~254、333~343、358~361、368~372、384~386、407~412、445~450、469~481、553~564、588~594、607~617、624~639位氨基酸区段。将重组质粒pc DNA3.4-LRRC15转染至HEK293细胞后,SDS-PAGE和Western blotting分析发现,在细胞分泌培养基、细胞裂解上清和沉淀中检测到LRRC15蛋白。从细胞培养基中纯化出LRRC15-His融合蛋白,SDS-PAGE显示在分子质量约为70 kDa处出现明显条带,Western blotting能够识别LRRC15重组蛋白条带。结论成功对猪囊尾蚴排泄分泌抗原中的LRRC15蛋白进行真核表达,并对其抗原表位进行了生物信息学预测,为进一步了解该蛋白的生物学功能奠定了基础。

摘要：目的构建猪带绦虫重组非分泌型pMG36e-TSOL18／***和分泌型pMG36e-SP-TSOL18／L．1actis疫苗。方法以GenBank中登录的猪带绦虫TSOL18基因序列为模板，以乳酸菌为宿主系统进行基因优化，采用基于PCR的精确合成（PAS）方法，设计引物，在其两端分别加入酶切位点Sac I/HindⅢ以及保护性碱基，在其N端添加SPUSP45分泌信号肽序列，分别合成TSOL18和SP-TSOL18目的基因。将目的基因克隆至大肠埃希菌-乳球菌穿梭表达质粒pMG36e，构建胞内型表达载体pMG36e-TSOL18和分泌型表达载体pMG36e-SP-TSOL18．进行测序和酶切鉴定；采用电穿孔转化法将两种重组质粒转化至乳酸乳球菌（Llactis）MG1363，构建猪带绦虫重组pMG36e-TSOL1／***和pMG36e-SP-TSOL18／***疫苗，并进行PCR鉴定。结果经SacI和HindⅢ双酶切．获得了相应的TSOL18基因片段和pMG36e载体片段，与预期结果相符；与TSOL18基因标准序列作比对，匹配度均为100％，均插入到pMG36e载体的SacI和HindⅢ中。重组pMG36e-TSOL18／***和pMG36e-SP-TSOL18／***的PCR结果均可见393bp的基因片段产物。结论成功构建了猪带绦虫重组pMG36e-TSOL18／***和pMG36e-SP-TSOL18／***疫苗。

摘要：目的构建和鉴定细粒棘球绦虫（珞）重组双歧杆菌（rBb）-Eg95疫苗。方法自行设计引物，从细粒棘球蚴包囊中分离原头节，超声粉碎后提取总RNA为模板，通过RT—PCR扩增获得Eg95抗原编码基因．采用BamH I和Eco RI双酶切，定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌（***—Bb）穿梭表达载体pGEX—IλT中．转化*** BL21（DE3）感受态细胞，构建重组质粒pGEX—Eg95。抽提质粒进行双酶切鉴定后，电穿孔转化到B6中，构建细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT—PCR扩增出471bp的Eg95抗原编码基因；重组质粒用双酶切鉴定可切出4947bp的载体片段和471bp的目的基因片段；以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到471bp的Eg95基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，为该疫苗的开发利用奠定了理论基础。

摘要：目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。

摘要："互联网+"时代的混合式教学模式融合了传统教学和网络教学的优势,已成为高等教育教学发展的重要趋势之一。为顺应这一发展趋势,人体寄生虫学课程团队合理运用现代信息技术手段,积极推进网络课程资源建设与应用,开展基于慕课和实验教学数字平台的线上线下混合式教学。实践表明,混合式教学模式对师生的教与学均具有积极影响,但学生个性化自主学习和深度学习仍不够理想。今后在网络课程资源建设、教学设计以及数字素养等方面还需要不断提升,以期打造具有高阶性、创新性、挑战度的线上线下混合式"金课"。

摘要：精品视频公开课是以高校学生为服务主体，同时面向社会公众免费开放的科学、文化素质教育网络视频课程与学术讲座。实践证明，学校的大力支持是建设精品视频公开课的前提，教师对课程内容讲授深浅的把握和用心的教学设计是建设精品视频公开课的基础。同时，还应兼顾较高的拍摄制作技术要求，只有主讲教师和摄制人员充分合作，才能保证摄制出高质量的视频公开课。