摘要：目的利用可视化和实时荧光环介导等温扩增(LAMP)技术,建立日本红菇的快速鉴别方法。方法基于日本红菇内转录间隔区的基因序列设计了特异性的LAMP引物,在23种蘑菇物种间进行特异性验证,通过检测10 ng/μL~1 fg/μL系列浓度的基因组DNA,评估方法的灵敏度。结果设计的LAMP引物可特异性鉴别日本红菇,不与其他蘑菇种类发生交叉反应。建立的LAMP方法检测灵敏度为1%混合蘑菇样本,或终浓度为2 pg/μL的日本红菇DNA。结论本方法可用于新鲜/干制蘑菇及烹饪后蘑菇的检测,检测时间<1 h,其中可视化方法无需专业仪器设备,适用于日本红菇的现场快速鉴别。

摘要：根据单核增生李斯特菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌0157：H7的特异性序列分别设计4对特异性引物,建立了一种快速检测上述4种常见食源性致病菌的多重PCR方法,并对反应体系中的模板、引物、rTaq酶、MgSO_4添加量以及退火温度进行了优化。结果显示：4对引物序列的特异性均较好,利用单重PCR对4种致病菌的灵敏度进行检测,其检测限均达到10~3copies/mL。多重PCR同时检测4种致病菌的灵敏度为10~3copies/ml,对人工污染猪肉中的4种致病菌的灵敏度检测为10~3cfu/mL。该检测方法不与其他菌产生交叉反应,与传统方法相比大大缩短了检测时间,并提高了检测的准确度。

摘要：灰树花(Grifola frondosa)又名贝叶多孔菌(Polyporus frondosus),其子实体具有鲜美的口味和很高的营养价值,在日本,灰树花不仅作为食物,而且作为药物均被珍视,是所有食用菌中最具潜力的免疫调节药物,其最有效成份灰树花多糖具有抑制肿瘤生长,阻止HIV对T淋巴细胞的破坏以及降血糖保肝等作用。固体发酵培养灰树花菌丝体提取多糖,比子实体提取多糖具有周期短、原料充足以及原料价格低等优点,是其发展的方向。 1 材料与方法 1.1 供试材料 灰树花蔗渣固体培养菌丝体干品。 1.2 工艺流程 菌丝体→加水煮沸浸提→过滤→浓缩→醇沉→分离→真空干燥→称量 1.3 正交设计 根据预实验结果,选择加水倍数、浸提时间、浓缩比重和醇沉浓度4项为考察因素,各取3个水平(表1),进行L_9(3~4)正交试验,并以醇沉得率为考察指标,筛选最佳工艺条件,每次菌丝体用量100g。

摘要：为建立一种检测肉制品中6种动物源性成分(牛、羊、鸡、猪、鸭和驴等)的多重PCR方法,比较了3种DNA提取方法,设计筛选了6对引物并对其特异性进行验证,同时对影响多重PCR扩增效率的因素(引物比例、退火温度和镁离子浓度等)进行优化。结果表明:试剂盒法为最佳的DNA提取方法;多重PCR法最优反应条件:引物比例为牛∕羊∕鸡∕鸭∕猪∕驴=2∕1∕1∕0.5∕1∕1,退火温度为58.6℃,镁离子浓度为3 mmol∕L,各动物源性成分DNA最低检出限为0.1 ng。该方法具有特异性强、灵敏度高、简单快捷等优点,可用于肉制品中6种动物源性成分的同时检测。