摘要：人工设计合成木聚糖酶,为木聚糖酶分子改造研究提供新思路。采用合成生物学思路,以黑曲霉XZ-3S木聚糖酶XynZF-2基因序列为基础,将N端48个氨基酸替换成EvXyn11 N端的34个氨基酸;引入芳香族氨基酸P9Y和H14F;在C端引入二硫键Cys38-Cys191;α-螺旋及cord区域分别引入疏水性氨基酸K164M、G166A、N160I、V111A以及G109A,设计杂合酶XynZL。基因全合成后,构建毕赤酵母重组表达质粒pPIC9K-ZL,将其转化酵母菌GS115,对工程菌GS115-XynZL进行单因素发酵条件优化及重组酶酶学性质测定。最佳发酵培养基为土豆培养基,最佳诱导温度为28℃,最佳种龄为20 h,最佳诱导时间为168 h,最佳诱导起始pH值为6.5,甲醇诱导最佳体积分数为15 mL/L。重组酶酶学性质显示:最佳反应温度为55℃,最适pH值为5.0,杂合酶XynZL在毕赤酵母中表达后具有特定性质和功能,其设计方法拓宽了木聚糖酶分子改造研究的思路。

摘要：通过单因素实验研究了诱导温度、种龄、p H、甲醇浓度以及诱导时间对毕赤酵母工程菌产木聚糖酶的影响。在此基础上进行响应面优化设计实验,并根据结果拟合小二乘二次项回归方程,探讨了各因素对木聚糖酶比酶活力的影响。确定了最优的发酵培养条件:种龄为31 h,诱导时间104 h,甲醇诱导浓度1%,发酵起始p H4.0,诱导温度为30℃,在此条件下对实验结果进行验证,得到木聚糖酶比酶活力为43526.3 U/mg。

摘要：根据绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422菌株内切葡聚糖酶基因egⅡ的cDNA序列,设计特异引物,以重组质粒pTG19-T-egⅡ为模板,扩增得到全长1 194bp的egⅡ成熟肽cDNA片段。将该片段分别克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,并在大肠杆菌Rosse(t DE3)和毕赤酵母GS115中进行了表达。重组大肠杆菌表达蛋白占菌体总蛋白的15%,表达产物无内切葡聚糖酶活性。重组毕赤酵母经甲醇诱导实现了分泌表达,在摇床水平上酶活性达到2 788U/ml。酶学性质分析表明,该酶作用的最适pH为4.5,pH 3.5～6.0范围内酶活性保留在80%以上;最适温度为50℃,55℃以下酶的稳定性在90%以上。

摘要：根据木聚糖酶Xyn43A基因序列,设计特异性引物,以p MD18-T-Xyn43A重组质粒为模板克隆Xyn43A成熟肽基因,将该基因分别克隆到大肠杆菌表达载体p ET-28a和毕赤酵母表达载体p PIC9K中,分别在大肠杆菌BL21及毕赤酵母GS115中表达。重组酶在大肠杆菌中胞内表达,比酶活力可达61.43 U/mg。重组酶在毕赤酵母中分泌表达,比酶活力可达145.24 U/mg。酶学性质显示,BL21-Xyn43A、GS115-Xyn43A重组酶最适温度、p H相同均为45℃、p H 5.0。GS115-Xyn43A温度稳定性、p H稳定性均优于BL21-Xyn43A。

摘要：对医学院校生物技术专业人才培养中毕业论文(设计)过程中存在的问题进行了简要总结,并就毕业论文的质量,提出了一些合理的建议,为深化生物技术专业教学改革、培养合格生物技术专业人才提供参考。

摘要：对来源于宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001的木聚糖酶XynⅡ进行同源建模和序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存在一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关,据此设计了XynⅡ的D37N定点突变。酵母表达的XynⅡD37N经纯化后与原酶XynⅡ（同样经毕赤酵母表达后纯化）进行酶学性质比较,结果表明,XynⅡD37N的最适pH由4.2升高到5.3,pH稳定范围由3.0-7.5缩减为3.0-5.5,但最适温度和热稳定性基本保持不变。结果证实,木聚糖酶XynⅡ的第37位Asp与最适pH相关,为进一步的结构与功能研究提供了理论基础。

摘要：《生物制药工艺学》实验是一门综合性和实践性很强的课程,但目前实验内容多为提前拟定,实验结果也已知,所以学生做实验的热情和好奇心不足。在教学改革中,我们发现,通过开展设计型探索实验,可以极大提高学生学习的积极性和主动性,促进思考,培养良好的科研态度和习惯,锻炼他们的组织管理与书面表达能力。故在以后的教学中,可以考虑多开展探索性和设计型实验,将学生实验教学和教师科研结合起来,充分调动老师和学生的积极性和主动性,提高教学效果。