摘要：从家蚕品种 Ｃ１０８ 和大造后部丝腺提取的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 用 Ｐｓｔ Ⅰ酶解后与自行设计的人工接头相连，并用与人工接头序列相匹配的选择性引物进行选择性 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增（ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ａｍ ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ） 。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测显示，用 Ｓ Ａ Ｄ Ｆ 法在两品种中能检测到稳定的 Ｄ Ｎ Ａ 多态性片段，表明此方法可用于分子标记的筛选。经研究发现：当 Ｐ Ｃ Ｒ 反应体系中 Ｍｇ２ ＋ 为１５ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ，ｄ Ｎ Ｔ Ｐｓ 为２００μｍ ｏｌ／ Ｌ，引物为１μｍ ｏｌ／ Ｌ 时可得到较好的结果；在热循环过程中，以５６ ℃退火为宜；扩增反应对模板 Ｄ Ｎ Ａ 质的要求远胜于量。

摘要：Bmi-1是一种转录抑制子,属于Polycomb家族成员之一。Bmi-1基因在调控正常或白血病干细胞的自我更新中起着至关重要的作用。缺乏Bmi-1表达的急性髓系白血病细胞遭遇了增殖阻止和表现了分化和凋亡的征兆,这些发现导致有人提议和认为Bmi-1在白血病治疗中可作为潜在靶点。本研究探讨靶向针对Bmi-1的短发夹RNA(shRNA)对人慢性髓系白血病K562细胞功能的影响。采用RNA干扰技术,构建靶向针对Bmi-1的shRNA真核表达载体,利用脂质体lipofactamine2000将shRNA真核表达载体转染入K562细胞中,经G418(400μg/ml)筛选得到抗性克隆。用PCR和Western blot分别检测转染shRNA后K562细胞中Bmi-1的mRNA和蛋白水平的变化;以MTT法检测干扰组、对照组和未转染组细胞间的增殖情况;以集落形成实验测定3组间集落形成能力。结果表明:在设计的4个shRNA片段中,有1个片段显示显著的抑制效果。该shRNA转染K562细胞后,在mRNA水平上Bmi-1的表达明显下调,Western blot在蛋白水平上也证实了Bmi-1表达显著下调。MTT法和集落形成实验显示了干扰组、对照组和未转染组细胞3者间的增殖能力没有显著差异。结论:抑制Bmi-1的表达并不能减少K562细胞的增殖,这提示了可能存在其它一些平行的信号通路在细胞转化中起重要作用,而且可能独立于Bmi-1的过表达。Bmi-1在慢性髓系白血病的转化中起着次要的作用。